大白菜叶斑病病原菌鉴定及抗性鉴定方法

摘要

大白菜细菌性叶斑病主要发生在生育后期叶片上，严重的会导致大白菜叶片开裂、枯败等，进而危害大白菜的品质和产量。该病害近些年来发生的频率日趋频繁，也日渐严重，而之前对该种病害专家和学者重视度较低，同时世界范围内也只有少数文献被报道。 本研究的目的是通过常规鉴定和分子鉴定，鉴定出哈尔滨地区大白菜细菌性叶斑病的致病菌是哪种病原菌，并进行寄主范围鉴定、回接鉴定、生理生化鉴定以及抗性鉴定方法研究。取得如下研究结果: 1.经过对哈尔滨地区大白菜叶斑病上分离的五株病原细菌的菌落形态、革兰氏染色和鞭毛染色进行常规鉴定，确定大白菜叶斑病病原菌属于假单胞菌Pseudomonadaceae。 2.对五株菌株进行回接鉴定，回接鉴定显示2号菌株接种的植株发病病症与田间大白菜叶斑病病症具有高度一致性，其他菌株发病病症则相差甚远，因此2号菌株很可能是大白菜细菌性叶斑病的致病菌。接下来对五株病原菌进行分子鉴定，经过对五株病原细菌的16srDNA序列分别在NCBI数据库中搜索比对。确定1号菌株属于恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida）;2号、4号、5号菌株属于绿黄假单胞菌（Pseudomonas viridiflava）;3号菌株属于丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae），且2号菌株的GenBank登录号MG686550。 3.对绿黄假单胞菌的寄主范围进行鉴定，发现其寄主范围较广，能够侵染豆科、瓜类、茄科、禾本科、百合科。 4.对绿黄假单胞菌进行生理生化鉴定，确定:(1)该菌株生长的最适温度为22℃，致死温度为53℃。②该菌株的耐盐性较差，在3％时受到一些抑制作用，而在5％就受到明显抑制，严重影响病菌的生长，在7％时完全抑制。(2)该菌株为好氧菌，厌氧条件下生长弱;(3)可以利用丙二酸盐和柠檬酸盐做为碳源，不能利用硝酸盐作为氮源;(4)该菌株过氧化氢实验反应呈阳性;产酸，不产气;能让明胶液化;能够生成硫化氢;甲基红实验是黄颜色，是阴性反应;V-P实验则是红颜色，是阳性反应。 5.试验初步建立大白菜对绿黄假单胞菌的抗性鉴定方法。以喷接的方法更容易发病，病症也更明显;最佳接种苗龄是5-6片叶;最佳接种温度是白昼15℃/黑夜10℃;最佳接种湿度是90-100％。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 研究目的及意义

1．2 文献综述

1．2．1 大白菜细菌性叶斑病

1．2．2 假单胞菌

1．2．3 丁香假单胞菌

1．2．4 绿黄假单胞菌

1．2．5 恶臭假单胞菌

1．2．6 假单胞菌分离、扩繁、菌种保存

1．2．7 细菌的鉴定

1．2．8 大白菜抗病育种

1．2．9 大白菜主要细菌性病害的抗病育种进展

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 供试菌株

2．2．3 病原菌鉴定

2．2．4 病原菌回接鉴定

2．2．5 系统进化树构建与寄主范围鉴定

2．2．6 病原菌的生理生化特性

2．2．7 大白菜对叶斑病抗性鉴定方法研究

2．2．8 病情调查

2．2．9 主要培养基的配方和制作

3 结果与分析

3．1．2 大白菜叶斑病病原菌分离与鉴定

3．2 病原菌系统发育分析与寄主范围鉴定

3．2．1 病原菌系统发育分析

3．2．2 病原菌寄主范围鉴定

3．3 病原菌生理生化特性

3．3．1 温度

3．3．2 耐盐性

3．3．3 其他生理生化特征

3．4 大白菜叶斑病菌抗性鉴定方法研究

3．4．1 不同接种组合发病情况

4．2 三种试验因素的极差分析

3．4．4 不同组合间多重比较

4 讨论

4．3 大白菜叶斑病生理生化特性

4．4 大白菜叶斑病病原菌抗性鉴定

4．4．1 抗性鉴定分析

4．4．2 病原菌抗性鉴定的结果与田间统计发病结论的对比结果

4．4．3 接种方法是活体接种鉴定方法一个重要方法

4．4．4 接种温度、苗龄和湿度对叶斑病发病的影响

4．4．5 病情分级标准的确定

4．5 论文的创新点

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文