龙葵果活性成分分离、体外抗氧化及对K562细胞增殖的抑制

摘要

龙葵（Solanum nigrum L.），被子植物门双子叶植物纲茄科（Solanaceae）茄属（Solanum）草本植物。龙葵中含有多种活性成分，具有抗氧化、抗癌、抗炎、保肝、提高免疫力等生理活性功能。以龙葵果为原料，优化龙葵果活性成分提取纯化工艺，比较不同活性成分的抗氧化能力和对人慢性白血病K562细胞的抑制效果，在此基础上对龙葵果皂苷二次纯化工艺进行优化，并初步探究龙葵果皂苷对K562细胞的抑制机理。
　　（1）通过单因素试验、全因子试验、爬坡试验和中心组合试验，运用响应面法优化了龙葵果活性成分的提取工艺。用80%乙醇，57.5℃，料液比1∶20.5 g/mL浸提4 h，龙葵果生物碱得率（0.824±0.001）mg/g；用20%乙醇，90.6℃，料液比1∶33.5 g/mL浸提2 h，龙葵果皂苷得率（8.253±0.270）mg/g；用蒸馏水，59.14℃，料液比1∶8 g/mL浸提2.15 h，龙葵果多糖得率（24.27±0.21）%。
　　（2）通过筛选树脂及单因素试验优化了龙葵果活性成分的纯化工艺。用AB-8树脂，上样浓度0.03 mg/mL，上样pH9，径高比1∶10，最大上样量0.60 BV，用3.0 BV pH3的70%乙醇洗脱，控制洗脱流速2.0 BV/h，使龙葵果生物碱纯度提高9.44倍；用AB-8树脂，上样浓度0.4 mg/mL，上样pH7，径高比1∶25，最大上样量0.63 BV，用3.0BV pH5的100%乙醇洗脱，控制洗脱流速2.0 BV/h，使龙葵果皂苷纯度提高2.93倍；用NKA-Ⅱ树脂，上样浓度20 mg/mL，上样pH5，径高比1∶30，最大上样量0.54 BV，用3.5 BV pH7的60%乙醇洗脱，控制洗脱流速2.0 BV/h，使龙葵果黄酮纯度提高7.60倍；用2%木瓜蛋白酶除去龙葵粗多糖中的蛋白质，在pH7，60℃条件下酶解2 h后，用体积比1∶3，浓度为90%的乙醇进行沉淀，龙葵果多糖纯度达到93.75%。
　　（3）对纯化前后龙葵果各活性成分的抗氧化能力进行比较，以清除DPPH·、HO·、抑制脂质过氧化能力和总还原力作为指标，各活性成分抗氧化能力由强到弱依次为：花色苷>生物碱>黄酮>皂苷>多糖，且均呈现浓度—剂量依赖关系。
　　（4）研究了龙葵果皂苷抗氧化能力与对人慢性白血病K562细胞抑制能力间的相关性。龙葵果皂苷对K562细胞抑制率与其抗氧化能力呈显著正相关关系，其中与清除生理性自由基—HO·能力呈极显著正相关（P<0.01）。
　　（5）优化龙葵果皂苷二次纯化工艺。用30~60目聚酰胺树脂，上样浓度0.2 mg/mL，上样pH7，径高比1∶30，最大上样量0.94 BV，依次用3.0 BV pH6蒸馏水、20%、40%、60%乙醇梯度洗脱，洗脱流速2.0 BV/h，龙葵果皂苷纯度提高到75.99%。
　　（6）初步探究了龙葵果皂苷对K562细胞的抑制机理。龙葵果皂苷对K562细胞有较强的抑制效果，且在低剂量下呈现剂量—效应依赖关系，龙葵果皂苷可能通过将细胞周期阻滞在G2/M期实现诱导K562细胞凋亡。

目录

1绪论

1.1龙葵简介

1.2龙葵果中相关活性成分概述

1.3研究目的与意义

1.4研究内容与方法

2龙葵果活性成分提取工艺优化

2.1 引言

2.2试验材料与试剂

2.3试验仪器与设备

2.4试验方法

2.5结果与分析

2.6本章小结

3龙葵果活性成分纯化工艺优化

3.1 引言

3.2试验材料与试剂

3.3试验仪器与设备

3.4试验方法

3.5数据处理与分析

3.6结果与分析

3.7本章小结

4龙葵果活性成分体外抗氧化功能研究

4.1引言

4.2试验材料与试剂

4.3试验仪器与设备

4.4试验方法

4.5数据处理与分析

4.6结果与分析

4.7本章小结

5龙葵果皂苷二次纯化、对K562细胞的抑制及与体外抗氧化的相关性

5.1引言

5.2试验材料与试剂

5.3试验仪器与设备

5.4试验方法

5.5数据处理与分析

5.6结果与分析

5.7本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

声明