食管癌高发区食管/贲门双源癌(同一个体)流行病理特征及血清microRNA表达

摘要

1研究背景与目的
　　 食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，显著的地域性分布差异以及与贲门腺癌高发区并存是其突出的流行病学特征。在中国食管癌高发区，食管癌主要组织类型为鳞癌，与贲门腺癌同时高发，提示两者可能具有相似的致癌因素和发病机制，本实验室10余年现场研究发现，食管鳞癌和贲门腺癌存在于同一个体的情况并非罕见，将其定义为同一个体同时或先后发生食管鳞癌和贲门腺癌，简称双源癌。本文旨在阐明食管癌高发区双源癌流行病理特征，为肿瘤防治工作提供流行病学依据。
　　 据文献报道及本实验室研究结果，双源癌漏诊情况严重，预后差，对于本病除了在临床实践中提高警惕性以外，探讨发病机制和寻找特异的肿瘤标记物，将有助于早期诊断和治疗，改善患者预后。
　　 研究发现miRNA是一大类基因表达调控因子，起着癌基因或抑癌基因的作用，调节大约1/3的人类基因。目前已进行各种肿瘤的miRNA表达研究，并取得了令人鼓舞的成绩，miRNA对肿瘤发病机制的探讨和发现干预治疗的新分子靶标必将起到一个非常重要的作用，同时可以作为一个肿瘤诊断标记物加以开发和利用。
　　 越来越多的文献报道血液和组织miRNA表达谱可以用来区分肿瘤和正常对照，如有文献报道miRNA可以作为乳腺癌的生物标记物，在检测肿瘤、指导预后和个体化治疗方面有一定的临床价值。我们假定双源癌病人血清中也存在特定miRNA表达谱，能够在诊断双源癌和探讨发病机制中起一定作用。血液中miRNA在癌症的非侵入性诊断标记物的探索中有着广阔的前景，我们通过目前比较成熟的芯片技术来研究双源癌血清miRNA表达，探索miRNA在双源癌中的诊断和发病机制中的意义。
　　 2材料与方法
　　 2.1研究对象
　　 采用问卷调查、家访、医院病案资料整理分析及病理学检查等方法，对豫北地区及河北磁县的双源癌病人资料进行收集整理，共收集431例双源癌病人资料，资料主要来源于当地数家医院及相关肿瘤登记机构，所有病人均经组织病理学证实。
　　 选取本实验室收集的林州地区4722例单发食管癌和贲门癌手术切除标本，将每例标本进行连续取材，全部石蜡包埋，每个蜡块均进行切片、HE染色，再次镜下观察、记录，筛选漏诊的双源癌，共检出112例，加上首次诊断的431例双源癌病人，共有543例，将所有收集到的临床资料录入Excel表，使用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理，检验水准采用α=0.05。
　　 挑选豫北地区和河北磁县临床资料齐全的5例双源癌、14例食管癌、13例贲门癌病人和16例正常对照血清标本，全部研究对象取清晨空腹非抗凝静脉血5mL，静置30min后，4℃1600转离心5分钟分离血清，将血清放置EP管-20℃保存待用。根据提取的miRNA量，部分样品做了技术重复以进一步消除随机误差。
　　 2.2 miRNA表达谱芯片杂交
　　 采用蛋白酶K消化法抽提血清总RNA，通过乙醇沉淀法分离小分子RNA，将分离出的小分子RNA与AFFY miRNA表达谱芯片进行杂交，将芯片清洗、染色后扫描。
　　 应用软件Affymetrix(?) GeneChip(?) Command ConsoleTM1.1将扫描得到的原始数据进行分析处理：本次数据分析所用到的相关软件：SAM软件；监督聚类分析和结果展示软件；miRNA芯片归一化分析及质控软件。
　　 3结果
　　 3.1双源癌的病理流行特征
　　 双源癌男：女=5.12:1，高发年龄60-70岁。双源癌中食管鳞癌和贲门腺癌均是Ⅱ期居多(55.56％、36.17％)；食管鳞癌以中分化为主(62.81％)，而贲门腺癌以低分化为主(48.41％)；食管鳞癌发病部位以中段居多(66.67％)；食管鳞癌以髓质型和早期癌比例最高(均为33.07％)，贲门腺癌以蕈伞型(29.92％)居多。双源癌病人进行家族史调查的共152例，其中男性132例，家族史阳性57例，阴性75例，女性20例，阳性4例，阴性16例，双源癌家族史阳性率40.13％，男性高于女性(43.18％vs20.00％P=0.049)。共随访双源癌病人124例，失访10例，有效随访114例，其中男性99例，中位生存时间36.70月，女性15例，中位生存时间22.00月(P=0.263＞0.05)；有随访资料并进行家族史调查的病人106例，阳性患者中位生存时间29.75月，阴性患者中位生存时间41.30月(P=0.424)。双源癌5年生存率17.54％，男女两组及家族史阳性和阴性两组生存率均无统计学意义。
　　 3.2双源癌血清miRNA表达谱
　　 3.2.1双源癌与正常对照比较筛选的结果
　　 采用SAM软件对2组芯片数据(包括生物学重复和技术重复)进行差异表达miRNA的筛选，筛选标准为：信度判断(P-value)控制在5％以内，同时差异倍数在1.5倍以上，即Fold Change＞1.5为上调，Fold Change≤0.667为下调。双源癌组与正常对照组比较筛选到12个表达上调的miRNA，分别为miR-320b、miR-320c、miR-320a、miR-92a、miR-486-5p、miR-627、miR-365、miR-1826、miR-923、miR-185、miR-129-star和miR-106a-star，上调倍数1.5192-3.8319。
　　 3.2.2双源癌组与食管癌组比较筛选的结果
　　 双源癌组与食管癌组比较筛选出12表达上调的miRNA，分别为miR-320b、miR-320c、miR-320a、miR-92a、miR-486-5p、miR-627、miR-365、miR-1826、miR-185、miR-129-star、miR-558、miR-629-star，上调倍数1.5162-3.7357;miR-1184表达下调，倍数为0.5927。
　　 3.2.3双源癌组与贲门癌组比较筛选的结果
　　 双源癌组与贲门癌组比较共筛选出11个表达上调的miRNA，分别为miR-320b、miR-320c、miR-320a、miR-92a、miR-486-5p、miR-638、miR-627、miR-365、miR-1826、miR-923、miR-149-star，上调倍数1.5505-6.1185。
　　 4结论
　　 双源癌漏诊情况严重，发病以男性为主，高发年龄60-70岁，男性家族史阳性率高于女性，5年生存率低，预后较差。miR-320b、miR-320c、miR-320a、miR-92a、miR-486-5p、miR-627、miR-365和miR-1826等miRNA在双源癌中较对照组明显上调表达，可能对双源癌诊断标记物的探索和发病机制的探讨有一定价值。

目录

文摘

英文文摘

1 食管癌高发区食管/贲门双源癌(同一个体)流行病理特征

1.1 引言

1.2 材料与方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

1 参考文献

1 附表

1 附图

2 食管癌高发区食管/贲门双源癌(同一个体)血清MICRORNA表达

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

2 参考文献

2 附表

2 附图

3 食管/贲门双源癌研究现状

3 参考文献

4 附录

5 中英文缩略词

6 个人简历

7 致谢