巨噬细胞移动抑制因子和结缔组织生长因子在食管癌中的表达及其与预后的关系

摘要

背景与目的:
　　 食管癌是人类常见的消化道恶性肿瘤,发病率在世界范围内居第6位,在我国有着更高的发病率。我省是食管癌的高发区,尤其是林州等地区有着更高的发病率。食管癌的发生和发展涉及多种抑癌基因和原癌基因的改变,现在还不能在分子水平上对食管癌做出充分的解释。食管癌早期症状隐匿,大多数患者就诊时已处于晚期,即使手术切除,预后仍很差。目前已经开展很多关于食管癌形态学和临床病理特征的相关研究,但是到目前为止仍然没有找到一种具有临床实用价值的预测因子。如能很好的判断预后,对筛选高危病人及帮助制定个体化治疗方案大有裨益。
　　 近年来肿瘤微环境中间质细胞、细胞因子等对肿瘤的发生、发展及转移等有重要作用,有报道食管癌的发生发展与炎症微环境关系密切。巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)主要来源于活化T淋巴细胞,可以抑制肿瘤微环境中巨噬细胞的游走。MIF功能复杂,不仅可以调节机体免疫、参与炎症反应,而且在多种组织器官纤维化过程中发挥重要作用。有研究报道MIF在多种肿瘤细胞中高表达,如肺癌、肝癌、食管癌、结直肠癌、头颈部鳞癌等。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,,CTGF)属于生长因子CCN基因家族,该家族还包括Cyr61(cysteine-rich61)、肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma over-expressed gene,Nov／CCN3)、Wisp-1／elml(CCN4)、Wisp-2／rCov1(CCN5)、Wisp-3(CCN6)。CTGF通过诱导肿瘤微环境中重要的间质细胞——成纤维细胞增殖,并分泌细胞外基质,参与多种细胞的生物学功能,如细胞增殖、黏附、血管生成和器官纤维化,而且和多种恶性肿瘤的发生、进展、转移及其预后有密切关系。本研究采用免疫组织化学染色法分别检测MIF和CTGF在84例食管癌组织中的表达情况,分析这二者的表达水平与食管癌临床病理特征之间的关系及其对患者预后影响,并探讨可能的调节途径及作用机制。目的在于能够为食管癌的预后评估及基因治疗提供理论依据。
　　 方法:
　　 1.收集2004年1月1日-2006年6月30日于郑州大学第一附属医院和河南省肿瘤医院胸外科接受手术切除的84例食管癌标本,所有标本均经病理确诊。所有病例无糖尿病、类风湿、甲状腺功能亢进等其他疾病,术前未接受化放疗或针对肿瘤治疗的靶向治疗。临床病历资料完整,电话随访所有患者,截止日期为2010年6月30日；生存时间以月为单位,计算自手术之日至死亡或最后随访时间；
　　 2.应用免疫组织化学染色法检测MIF和CTGF在84例食管癌组织中的表达水平,并分析这两个指标与食管癌临床病理参数之间的关系及其表达水平对预后的影响,探讨其在食管癌中的作用；
　　 3.采用SPSS10.0统计软件包对所有实验数据进行统计分析。计数资料比较采用x2检验,采用Kaplan-Meier法计算生存率及描绘生存曲线,Cox比例风险模型进行多因素生存分析,Spearman等级相关进行MIF和CTGF表达的相关性分析,以a=0.05作为检验水准。
　　 结果:
　　 1.MIF在食管癌组织中广泛表达,阳性着色呈灶状或弥漫性分布,主要位于肿瘤细胞细胞质,呈棕黄色颗粒,也有少数表达于细胞核。MIF的表达与食管癌患者的年龄、性别、组织学类型、区域淋巴结转移情况、肿瘤分化程度在统计学上无明显差异(P>0.05),但是与患者的肿瘤浸润深度(P=0.006)和临床分期密切相关(P=0.023)；
　　 2.CTGF阳性蛋白主要定位于肿瘤细胞细胞质或胞膜,棕黄色或棕褐色颗粒,还可见于癌组织周围的间质纤维结缔组织和平滑肌。CTGF的表达与患者的年龄、性别、组织学类型、区域淋巴结转移情况、肿瘤分化程度在统计学上无明显差异(P>0.05),但与患者的肿瘤浸润深度(P=0.011)和临床分期密切相关(P=0.006);
　　 3.在84例食管癌组织中MIF表达分阴性、阳性和强阳性3组,生存曲线分析显示,强阳性表达组与患者预后显著负相关,阴性和阳性表达组术后累计生存率显著高于强阳性表达组(P=0.021)；
　　 4.CTGF分高表达和低表达两组,高表达组与低表达组相比,高表达组患者生存低于低表达组,即CTGF高表达组与患者预后显著负相关(P=0.001)；
　　 5.以患者的年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度、癌组织中CTGF和MIF表达水平为变量,进行Cox多因素回归分析,结果显示,食管癌的独立预后因素为TNM分期(P=0.002)、肿瘤分化程度(P=0.000)及CTGF表达水平(P=0.023)(见表3)；
　　 6.食管癌组织中MIF和CTGF蛋白表达的相关性分析,在84例食管癌组织标本中,MIF和CTGF同时低表达为30例,同时高表达为21例,通过2×2配对资料的关联性分析,显示二者在食管癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.238,P=0.024)。
　　 结论:
　　 1.MIF和CTGF在食管癌中的表达与肿瘤的浸润深度和临床分期密切相关,提示其高表达促进了食管癌的发展和浸润,炎症反应和纤维化与食管癌的浸润和转移有密切关系；
　　 2.MIF和CTGF高表达患者预后较差,低表达组预后较好,提示二者在食管癌的转归过程中有重要作用,临床上可以提示食管癌患者的预后情况；
　　 3.MIF和CTGF在食管癌组织中的表达呈正相关关系,说明二者在食管癌中的高表达可能具有协同作用,共同参与了食管癌的发展、浸润及转移过程。
　　 4.TNM分期、肿瘤分化程度及CTGF表达水平是食管癌的独立预后因素,临床上通过联合检测上述指标可以判定食管癌的预后；