雄黄对Bcl-2和Bax在原代培养的人脑胶质母细胞瘤细胞中表达的影响

摘要

背景与目的:胶质母细胞瘤是中枢神经系统中常见的来源于神经上皮组织的恶性肿瘤，对周围组织具有侵袭性，呈浸润性生长，无包膜，边界不清，术后易复发。目前胶质母细胞瘤尚无法根治，临床上多采用以手术为主，辅以放疗、化疗、生物及免疫治疗的综合治疗。目前雄黄在抗肿瘤方面的应用仅限于血液系统肿瘤的治疗，疗效明显并取得了较高的缓解率。但尚未见关于雄黄对中枢神经系统恶性肿瘤作用的相关研究报道。
　　 细胞培养已成为医学基础与临床研究过程中的一项重要技术。在体外培养条件下借助细胞超微结构的研究手段，将为深入研究细胞瘤增殖、凋亡相关的分子机制提供了新的线索和手段。随着对细胞凋亡研究的深入，发现许多疾病的发生都与细胞凋亡失调有关，细胞凋亡的研究也因此成为当今生命科学领域中最引人瞩目的领域之一。Bcl-2是迄今研究的最深入、最广泛的凋亡调控基因家族。Bcl-2具有抑制细胞凋亡的作用，而该家族的另一成员Bax则促进细胞的凋亡。
　　 本课题以取自人脑胶质母细胞瘤的为材料首先将细胞从肿瘤组织中分离出来，而后通过检测Bcl-2和Bax两基因在雄黄干预前后mRNA表达量的变化，初步探讨雄黄在抗肿瘤方面的分子机制。
　　 材料与方法:研究对象为2010年4月至2010年12月郑州大学第二附属医院神经外科手术切除的9例胶质母细胞瘤标本(均于术后经病检证实)。所有病例均为原发病例，术前未行化疗及放射治疗。肿瘤术中切除后，挑选肿瘤外观较好的组织保存于事先配置的取材培养基中，于0℃-4℃保存。术后即刻行肿瘤组织的分离培养。按照2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准，9例均为胶质母细胞瘤。首先采用冷胰酶分离方法将细胞从肿瘤组织中分离出来。分离后采用吉姆萨染色对培养细胞进行形态学观察。而后，所有标本均采用贴壁培养的方法，于细胞在对数生长期内进行传代，以雄黄溶液干预其生长。雄黄溶液浓度分为低浓度(40mg/L)和高浓度(70mg/L)两组。采用RT-PCR法检测Bcl-2基因和Bax基因的mRNA在雄黄干预前后胶质母细胞瘤细胞中的表达量。统计学采用SAS9.1统计软件，检验标准：α=0.05。
　　 结果:
　　 1、吉姆萨染色结果：镜下可见细胞核呈紫罗兰色，核仁蓝黑色，细胞质透光发亮，并可见细胞及细胞核形状、大小不一，并出现双核及多核现象，形态学上与肿瘤细胞相符合。
　　 2、RT-PCR检测结果：Bcl-2基因在雄黄溶液干预前后的表达量分别为：0.89±0.04，0.46±0.05(40mg/L)，0.48±0.04(70mg/L)；Bax基因在雄黄溶液干预前后的表达量分别为0.20±0.05，0.69±0.08(40mg/L)，0.74±0.09(70mg/L)，雄黄干预前后二者mRNA表达量的差异具有统计学意义，但不同浓度间的差异无统计学意义。
　　 结论:雄黄诱导人脑胶质瘤细胞凋亡发生的机制可能与凋亡正性作用基因Bax的表达增强及凋亡负性作用基因Bcl-2的表达减弱有关。