食管鳞癌组织中BTG1 mRNA和蛋白的表达及意义

摘要

目的：食管癌是起源于食管上皮组织的恶性肿瘤，起病隐匿，早期症状轻且特异性低，仅在吞咽硬质食物时可能会有轻重不一的不适感觉，且时轻时重反复出现，易于食管炎相混淆，难以引起患者注意而延误最佳治疗时机，所以多数病人就诊时已进入中晚期。据统计，食管癌的发病率在全国各类型恶性肿瘤中排名第5，死亡率排名第4，由于发病率高、死亡率高、早期诊断率低，食管癌已成为严重危害人类身心健康的恶性疾病，原国家卫生部将食管癌确立为我国临床十大恶性肿瘤之一。早期食管癌经积极治疗后5年生存率较高，然而中晚期食管癌的5年生存率极低，最主要的原因是易发生浸润和转移。食管癌的组织学分型包括鳞状细胞癌、腺癌、未分化癌、癌肉瘤、小细胞癌等，其中以鳞状细胞癌最常见，约占食管癌的90％以上。目前食管癌的具体发病机制仍不清楚，但基因异常学说已逐渐得到大部分学者的认可，因此从基因水平探讨食管癌的发病机制、寻求食管癌的易感基因及新的诊疗手段已成为肿瘤研究领域的大趋势。B细胞转位基因1（B-cell translocation gene1，BTG-1）是BTG/Tob抗增殖基因家族中的一员，最早是在研究慢性B型淋巴细胞白血病中MYC定位时发现的[3]，其易位点为t（8；12）（q24；q22），进一步研究发现BTG1定位于人类第12号染色体上，含有5620个碱基对，能编码171个氨基酸，分子量为19027[4]。BTG1具有强大的抑制细胞增殖、促进细胞凋亡等功能，在多种肿瘤组织中出现表达下调或缺失现象，且参与调控许多相关蛋白的表达，进而影响细胞生长、细胞周期调控、细胞分化、发育、凋亡等多种细胞进程，与许多恶性肿瘤的发生、发展关系紧密，如非小细胞肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、前列腺癌、乳腺癌、淋巴瘤等。而 BTG1在食管癌发生、发展中的作用目前鲜少见报道，本实验采用原位杂交、免疫组织化方法检测BTG1mRNA及蛋白在169例食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织、50例食管正常粘膜组织中的表达情况，分析 BTG1mRNA及其蛋白之间的关系，及它们与ESCC临床病理参数之间的关系。
　　方法：从2012年3月至2015年7月郑州大学第一附属医院存档的手术蜡块中随机选取169例 ESCC标本，查阅所有病例患者的病历资料证实术前无放化疗、生物治疗等积极治疗史。分别取无坏死癌组织和远端正常食管粘膜组织，经多聚甲醛（40g/L）固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6μm，分别用于HE、免疫组织化学及原位杂交染色。全部169例标本均经组织学证实为食管鳞状细胞癌。根据组织学分级分为三组：其中Ⅰ级47例，Ⅱ级71例，Ⅲ级51例；根据有无淋巴结转移分为两组：伴淋巴结转移者67例，无淋巴结转移者102例；根据浸润深度分为两组：浸润深度达黏膜下层或浅肌层者54例（浅层），浸润深度达肌层或外膜层者115例（深层）；根据临床分期分为两组TNM分期（UICC1997）：Ⅰ-Ⅱ期128例，Ⅲ-Ⅳ期41例。采用原位杂交和免疫组织化学方法分别检测了169例ESCC组织和50例正常食管粘膜组织中BTG1mRNA和蛋白的表达情况，应用SPSS17.0统计学软件进行数据统计，应用χ2检验进行组间表达差异，应用spearman检验进行BTG1mRNA与蛋白的相关分析，检验水准为α=0.05，P<0.05时差异具有统计学意义。
　　结果：⑴BTG1mRNA主要存在于细胞质中，为蓝紫色颗粒样物质，主要分布于食管正常粘膜组织中。BTG1 mRNA在ESCC组织中的阳性表达率为24.9%，在食管正常组织中的阳性表达率为76.0%，两组间比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。⑵BTG1蛋白主要存在于细胞质内，为浅黄色至棕黄色颗粒样物质，主要分布于食管正常粘膜组织中。BTG1蛋白在ESCC组织中的阳性表达率为23.7%，在食管正常粘膜组织中的阳性表达率为62.0%，两组间比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。⑶BTG1 mRNA及其蛋白的表达与组织学分级无关（P>0.05）、与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0.05）。⑷BTG1 mRNA与其蛋白在ESCC组织中的表达强度呈正相关（γ＝0.678，P=0.00）。
　　结论：①食管正常粘膜组织中BTG1mRNA的表达显著高于其在ESCC组织中的表达。②食管正常粘膜组织中BTG1蛋白的表达显著高于其在ESCC组织中的表达，且BTG1 mRNA与其蛋白的表达具有明显正相关关系。③ESCC组织中BTG1 mRNA和蛋白的表达与癌组织的浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤的TNM分期密切相关，与癌组织的组织学分级无关。

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中英文缩略词对照表

前言

材料与方法

1 标本来源

2 主要仪器设备

3 主要试剂及试剂盒购买

4 常用试剂及切片的制备

5原位杂交（in situ hybridization histochemistry ISHH）

6 免疫组织化学的主要步骤（S-P法）

7 结果判断

8 统计学分析

实验结果

1 BTG1mRNA及蛋白在ESCC组织、食管正常粘膜组织中的表达情况

2 BTG1mRNA及蛋白的表达与ESCC临床病理学特征的关系

3BTG1 mRNA及蛋白在ESCC组织中表达的相关性分析

讨论

附图与附表

全文结论

参考文献

综述:BTGL与恶性肿瘤关系的研究最新进展

个人简历、在校期间发表的论文

致谢