肌肉特异性microRNAs在Duchenne型肌营养不良全血中的表达

摘要

研究背景：
　　Duchenne型肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是最常见的肌营养不良类型，属于X染色体隐性遗传病，由位于Xp21片段上的抗肌肉萎缩蛋白（dystrophin）基因突变而致骨骼肌肌膜上dystrophin缺失引起。目前，DMD的诊断主要依靠临床表现、血清肌酸激酶（creatine kinase，CK）、肌肉病理与免疫组化、基因检测等，但血清CK值容易受应激、感染、损伤等多种因素的影响，且诊断的特异性较差；肌肉病理与免疫组化属于有创性检查，而基因检测所需费用较高。因此，探寻诊断DMD的非侵入性、稳定的新型生物标志物具有重要意义。MicroRNAs（miRNAs/miRs）是一类约含有19～25个核苷酸（nucleotide,nt）的非编码单链微小RNA，在人类基因组中，大约有30％的基因受miRNAs的调节，具有高度的保守性、时序性和组织特异性。在众多的miRNAs家族中，miR-206、miR-1、miR-133a/b属于经典的肌肉特异性miRNAs，它们组成进化过程中保守的肌肉转录调节网络，在肌肉的正常生长发育、能量代谢与肌肉的损伤、坏死等病理过程均发挥重要作用。近年来，外周血miRNAs已被视为多种疾病潜在的生物标志物，如：癌症、肝损伤、心血管疾病等，但关于循环血中miRNAs能否作为诊断DMD的研究相对较少。
　　研究目的：
　　探讨全血肌肉特异性miR-206、miR-1、miR-133a/b作为诊断DMD的新型、非侵入性生物标志物的可能性，为DMD的诊断提供依据。
　　研究对象及方法：
　　收集2013年1月~2015年5月期间于郑州大学第五附属医院就诊的6-17岁DMD男童24人（平均年龄8.88±2.72岁）作为DMD组；选择家庭、经济条件等与实验组相似的6-17岁健康男童24人（平均年龄8.71±2.63岁）作为健康对照组。两组年龄、身高、体重等均无统计学意义（P>0.05）。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测DMD组与健康对照组儿童全血中肌肉特异性miRNAs的表达，采用Pearson相关分析法分析DMD组患儿肌肉特异性miRNAs与年龄、肌力与肌肉功能之间的相关性，绘制ROC曲线判断肌肉特异性miRNAs作为DMD诊断标准的可靠性。
　　结果：
　　1.肌肉特异性miRNAs的表达情况
　　肌肉特异性miRNAs在DMD组患儿全血中的表达明显高于对照组，两组比较有显著差异（P<0.05）。
　　2.肌肉特异性miRNAs与年龄、肌力、肌肉功能之间的相关关系（r）DMD组中肌肉特异性miRNAs在全血中的表达水平与年龄呈低度负相关（P<0.05），与肌力、肌肉功能呈中度正相关（P<0.05）。
　　3.ROC曲线结果
　　DMD组中全血肌肉特异性miRNAs的ROC曲线下面积（AUC）≥0.87，灵敏度及特异度均良好，尤以miRNA-206为著。
　　结论：
　　肌肉特异性miRNAs在DMD患者全血中的表达水平与临床病情进展密切相关，可作为诊断DMD的新型潜在、非侵入性生物学标志物，在临床工作中可不必分离血清而直接测定全血中肌肉特异性miRNAs的表达来筛查DMD，为诊断DMD提供了新的理论依据。

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中英文缩略词

前言

材料和方法

1 研究对象及分组

2 实验仪器及试剂

2.1 主要实验仪器

2.2 主要实验试剂

2.3 主要试剂盒的组成及试剂的配制

3 试验方法

3.1 全血miRNAs的提取

3.2 miRNAs逆转录合成cCDNA第一链

3.3 实时荧光定量PCR检测

4 肌力与肌肉功能评定

5 统计学分析

结果

1 肌肉特异性miRNAs的表达情况

2 肌肉特异性miRNAs与年龄、肌力及肌肉功能的相关性（r）

3 ROC曲线结果

讨论

结论

参考文献

综述: MicroRNAs与进行性肌营养不良的研究进展

个人简历及在校期间发表的论文

致谢