多发性硬化导致的膀胱功能障碍以及雌激素对其治疗作用的研究

摘要

背景和目的：
　　多发性硬化导致的膀胱功能障碍是泌尿系统里面极为复杂的疾病。多发性硬化会给中枢神经系统带来多样的病理变化，与此同时会出现各个系统临床症状。对于泌尿系统，由于受损的泌尿系功能相关的神经病变部位以及受损伤程度不同也会导致泌尿系统功能也将出现各种变化，其中膀胱功能障碍主要表现为尿频、尿急、尿潴留、尿失禁等。目前对于多发性硬化这个疾病本身的研究较多，而关于多发性硬化神经源性膀胱研究则较少.治疗方法上面也是主要以控制症状，改善泌尿系统功能为主，比如间歇导尿、抗胆碱药物、肉毒素、辣椒素、手术等等，治疗效果并不理想，针对多发硬化的治疗如免疫抑制剂、免疫球蛋白注射、血浆置换以及β-干扰素等效果也不能让人们完全满意，因此需要一种新的同时针对多发性硬化和神经源性膀胱的治疗方法。近期有研究表明男女性别的差异会造成自身免疫性疾病发病差别，女性患者多发性硬化的患者是男性的2倍，女性怀孕后期多发性硬化发病率降低到原来的20％，有研究表明雌性激素对多发性硬化有防止疾病进一步恶化，促进神经修复的作用。另外还有报道证明雌激素受体在膀胱的分布，以及雌激素对女性膀胱结构和功能的影响，提示了雌激素在治疗多发性硬化神经源性膀胱的潜在可能。本实验通过实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）的动物模型观察多发性硬化导致的膀胱功能障碍，并通过给予模型动物适量的雌激素处理，观察模型动物变化情况，初步验证雌激素在多发性硬化中神经源性膀胱的可能治疗作用。
　　实验方法：
　　1.建立EAE小鼠模型：8-13周的C57BL/6雌性小鼠，应用200ug mog35-55，与等体积含CFA量为10mg/ml的完全弗氏佐剂混匀，完全乳化成乳剂，皮下两点注射，于免疫当天及免疫后48小时腹腔注射400ng百日咳毒素诱导EAE小鼠模型。自免疫当天起，观察并记录大鼠体重变化、临床表现及神经功能评分。
　　2.分组以及给药：选取雌性C57BL6小鼠30只，随机分10只对照组单纯给予完全费氏佐剂以及百日咳，10只为EAE模型组，10只为雌激素处理组，即在完成免疫处理后每日给予雌激素（50μmol/L）100μl皮下注射。
　　3.标本采集：在试验23天时，将小鼠用10%水合氯醛麻醉后，取出膀胱组织，称重，放入液氮中保存，然后取多聚甲醛进行全身灌流，取出小鼠脊髓组织用于制作石蜡切片。
　　4.相关指标检测：Luxol fast blue（LFB）染色和苏木素-伊红（HE）染色观察脊髓炎性细胞浸润及脱髓鞘情况，用Western-Blot检测膀胱组织中雌激素受体蛋白表达变化情况。
　　结果：
　　1.EAE模型组的小鼠：神经功能临床评分、体重、以及泌尿系统功能变化都具有典型的MS临床表现，HE染色表现出较明显相关的炎性细胞浸润。LFB染色表现出了明显的脊髓脱髓鞘现象。
　　2.在多发性硬化神经源性膀胱小鼠膀胱组织中，相对于对照组小鼠膀胱中雌激素受体明显降低，给予雌激素治疗后，雌激素受体表达略微上调。
　　3.在给予EAE小鼠雌激素治疗后，小鼠发病率降低，症状严重程度较未特殊处理的EAE小鼠轻，平均神经功能评分降低。
　　结论：
　　1.EAE神经系统临床症状的评分与多发硬化性神经源膀胱的症状密切相关。
　　2.雌激素以及雌激素受体在多发硬化性神经源膀胱疾病中发生可能起到重要用。
　　3.在对EAE模型小鼠进行雌激素处理后，发病率以及症状严重程度相对于未经雌激素处理的模型组明显降低，表明雌激素对多发性硬化导致神经源性膀胱有明显的改善作用。

目录

声明

缩略词对照表

前言

材料与方法

1 材料

1.1 研究动物以及分组

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 实验方法

2.1 溶液的配制

2.2 动物模型的建立

2.3 临床症状

2.4 EAE小鼠排尿功能变化情况

2.5 小鼠的灌注固定、标本采集

2.6 western blot 实验步骤

3 统计学处理

实验结果

1 体重

2 临床评分

3 膀胱变化

4 脊髓LFB-HE染色的浸润情况

5 Western-blot检测ER的表达情况

讨论

结论

附图

参考文献

综述:神经源性膀胱研究现状

个人简历

致谢