昆明鼠腹腔感染弓形虫速殖子病理学及MIC3在速殖子上分布的研究

摘要

为了研究昆明鼠腹腔感染弓形虫速殖子病理变化及微线体蛋白3（MIC3）在速殖子上的分布，对25只45~55日龄的雌性昆明鼠进行腹腔注射，每只小鼠1×105个国际标准株RH TypeI型弓形虫速殖子，通过临床症状观察，将感染弓形虫的昆明鼠断颈处死，无菌收集腹液，显微镜下观察速殖子的活力，并用血球计数板对所收集腹液中的速殖子进行计数，分别于4℃、-20℃、-80℃保存虫株，观察弓形虫速殖子在特定环境下可存活时间的长短；腹液涂片作间接免疫荧光染色（Indirect immunofluorescent assay，IFA），观察MIC3在弓形虫速殖子上的分布；取心、肝、脾、肺、肾、脑固定，常规石蜡切片，然后通过HE染色结合免疫组化染色（IHC）观察各组织器官的病理变化及弓形虫在各组织器官的分布。试验结果如下：
　　1、临床诊断：昆明鼠腹腔注射弓形虫速殖子24h，昆明鼠精神略微下降，活动减少，采食、饮水正常；48h，其精神状况不佳，采食、饮水量下降；72h，其精神沉郁、喜卧，刺激挪动位置，采食、饮水量明显下降或无采食，被毛逆立，弓背，腹部膨大，出现该临床症状后，常规收集腹腔液，作悬滴片，显微镜下观察，可见大量有活力的弓形虫速殖子及巨噬细胞、淋巴细胞、肥大细胞等细胞成分。
　　2、弓形虫保种试验结果：在4℃冷藏保种15d后，弓形虫速殖子仍可感染小鼠；在-20℃低温冻存30d后，在显微镜下，仍可以观察到活的速殖子，接种小鼠，致其发病；在-80℃超低温冻存50d后，对小鼠攻虫，确定其发病后，可在腹腔液中观察到大量速殖子。
　　3、小鼠剖检病变：感染组小鼠腹壁血管充血，肝脏、脾脏肿大，肝脏可见米粒大、白色坏死灶；肠壁血管充血。
　　4、病理组织学变化：
　　HE染色结果：昆明鼠感染弓形虫后，在20只感染组小鼠中，18只小鼠的肝脏和脾脏发现弓形虫纳虫泡及假包囊。在肝脏，肝索排列紊乱，部分肝细胞发生水泡变性、坏死；脾脏中细胞坏死，淋巴细胞减少，且纳虫泡及假包囊主要集中在红髓区域；肺脏充血、出血，肺泡壁毛细血管扩张充血；心脏间质增宽，充血，动脉血管扩张，肾小管上皮细胞肿胀、坏死，肾小管间毛细血管充血；脑组织血管充血，少量神经细胞坏死。
　　免疫组化染色结果：通过免疫组化染色，可将弓形虫抗原所在的位置染成棕黄色，可观察到感染组小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑染色结果均呈阳性，结果说明弓形虫抗原在各组织均有分布，感染弓形虫后，其随着血液循环及淋巴循环进入各组织，致使小鼠发病。
　　5、免疫荧光染色结果：利用免疫荧光染色，在倒置荧光显微镜下可见弓形虫速殖子及假包囊发出黄绿色荧光。
　　研究结果表明：昆明鼠对弓形虫较易感，适合作弓形虫急性感染模型；腹腔注射后，弓形虫速殖子首先侵入的器官是肝脏、脾脏，在组织内形成假包囊，并且随着血液循环及淋巴循环，进入各器官，引起一定程度的损伤，弓形虫感染昆明鼠是一个急性过程，眼观剖检病变较为轻微。利用间接免疫荧光染色，表明MIC3在弓形虫速殖子的表膜及头部散在分布。

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中文摘要

1 文献综述

1.1 弓形虫研究进展

1.2 弓形虫抗原研究进展

2 引言

3 材料与方法

3.1 试验材料

3.2 试验方法

4 结果与分析

4.1 小鼠临床症状

4.2 小鼠腹腔炎症反应

4.3 弓形虫不同保种方法中，速殖子的存活时间

4.4 剖检病理变化

4.5 吉姆萨染色结果

4.6 HE染色结果

4.8免疫组织化学染色结果

4.9 间接免疫荧光染色结果

5 讨论

5.1弓形虫病及其入侵宿主细胞

5.2 弓形虫免疫逃避

5.3弓形虫感染的影响因素

5.4 MIC3的功能及应用

6 结论

6.1 由本试验得出的结论

6.2 还需要进一步研究内容

参考文献

英文摘要