降解黄曲霉毒素B1枯草芽孢杆菌的筛选及其功能研究

摘要

黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一类由黄曲霉、寄生曲霉等真菌分泌的代谢产物，普遍存在于多种粮食作物和饲料中，有很高的致畸、致癌和致突变作用，不仅危害人类和动物的健康，而且对经济造成重大影响。本研究旨在分离筛选出能高效降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的目的菌株，并对2株筛选菌的发酵条件进行优化，之后研究2株菌配合对AFB1的降解效果。主要研究内容如下：
　　（1）降解黄曲霉毒素B1的菌株的筛选：本试验以香豆素为唯一的碳源和能源从土壤、酸奶、鸡肠内容物、益生菌产品及实验室保存的菌种中进行目的菌株的初步筛选，共获得18株能在香豆素平板上良好生长的菌株。其中3株从土壤中分离；3株来源于发酵的酸奶制品；2株从动物粪便得到；3株从益生菌产品分离获得；7株取自于实验室保存菌株。然后以菌株对AFB1的降解率作为筛选指标，筛选出8株降解效果较好的菌株，最终选择2株降解率在80％以上的菌株为目的菌株命名为K-3、K-TM，两株菌对黄曲霉毒素B1的降解率分别为83.87%、80.25%。
　　（2）目的菌株K-3、K-TM细菌分类学鉴定，根据其形态学观察、生理生化特性和16S rRNA序列分析，鉴定目的菌株K-3、K-TM均为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。
　　（3）以对黄曲霉毒素B1降解率为依据，优化目的菌株培养条件，最佳培养条件为：菌株K-3的装液量为50mL/250mL、温度37℃、4%接种量、初始pH7.0、发酵周期48h，在此前提下150r/min振荡培养，对AFB1降解率达到88.07%（P＜0.05）；菌株K-TM的装液量为50mL/250mL、温度37℃、6%接种量、初始pH7.0、发酵周期60h，在此前提下150r/min振荡培养，对AFB1降解率达到84.81%（P＜0.05）。在最佳培养条件基础上培养好目的菌株K-3、K-TM并混合，以对黄曲霉毒素B1降解率为依据，对黄曲霉毒素B1降解率最高的组合是K-3、K-TM按1:2的比例组合，对黄曲霉毒素B1降解率达到88.43%。本研究为益生菌在降解黄曲霉毒素中的应用提供了理论基础及试验依据。

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1 文献综述

1.1 黄曲霉毒素概况

1.2 枯草芽孢杆菌的简介

1.3 研究内容和意义

2 引言

3 黄曲霉毒素B1降解菌的筛选

3.1 材料

3.2 分析方法

3.3 试验方法

3.4 结果

3.5 讨论

3.6 小结

4 黄曲霉毒素B1降解菌的鉴定

4.1 材料

4.2 试验方法

4.3 实验结果

4.4 讨论

4.5小结

5 芽孢杆菌降解黄曲霉毒素B1条件的优化

5.1 材料与仪器

5.2 试验方法

5.3 结果

5.4 讨论

5.5 小结

6 结论

参考文献

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