青藤碱对佐剂关节炎大鼠HPA轴、外周血单个核细胞皮质酮受体及滑膜组织CRH、ACTH表达的影响

摘要

目的：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一类以慢性、对称性、多关节炎症为主要表现的自身免疫性疾病，最终可影响关节功能甚至致残。其侵犯的靶器官主要是关节滑膜。该病的病因尚不完全明确。近年来，神经-内分泌-免疫网络途径在RA的发病机制中越来越受到重视。业已证实，该系统对RA发病的免疫调节主要是通过下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA轴)实现的。HPA轴在抑制RA炎症反应和免疫功能调节中具有重要作用。糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GCR)不仅是糖皮质激。素(glucocorticoid，GC)或皮质醇(大鼠体内为皮质酮)免疫信号的介导者，其本身也是机体免疫调节的有效工具。其与靶细胞结合量的变化可能与RA的发生、发展有一定的内在联系。青藤碱(sinomenine)可能是通过HPA轴，增强肾上腺皮质激素的分泌，起到非特异性抗炎作用。然而，对于青藤碱通过HPA轴治疗RA的临床和实验室研究目前开展的很少。本课题以佐剂关节炎(adjuvant-induccd arthritis，AA)大鼠模型为基础，观察研究青藤碱对其关节炎症程度，血浆促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin release hormone，CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone，ACTH)和皮质。酮，滑膜组织CRH、ACTH表达以及外周血单个核细胞GCR表达的影响，探讨HPA轴在RA发病机制中的作用以及青藤碱的治疗效果。方法：(1)将125只雄性Wistar大鼠随机分为5组，每组25只。I组：正常对照组，II组：单纯造模组，III组：造模+低剂量青藤碱治疗组，Ⅳ组：造模+中剂量青藤碱治疗组，V组：造模+高剂量青藤碱治疗组。第II～V组每只大鼠多点皮内注射完全性弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant，CFA)制作AA大鼠模型。造模成功率依据关节炎指数(arthritisindex，AI)评定。各组又根据造模后不同时间点(7、14、28、35及42天)各分为5个亚组。(2)造模后第14天开始，Ⅲ组、Ⅳ组和V组分别给予青藤碱注射液15mg/kg·d，30mg/kg·d，60mg/kg·d肌肉注射治疗。(3)测定不同时间点各组大鼠的踝关节下足垫厚度，并进行AI评分。(4)应用放射免疫分析法检测不同时间点各组大鼠血浆CRH、ACTH及皮质酮浓度。(5)应用放射配体结合分析法检测外周血单个核细胞GCR表达情况。(6)对不同时间点各组大鼠滑膜组织进行CRH、ACTH的免疫组织化学染色，采用真彩病理图象分析系统进行定量分析。(7)观察不同时间点各组大鼠踝关节病理改变，并进行病理积分评定。(8)应用SPSS 14.0统计软件进行统计学分析。 结果：(1)AI：第II组大鼠造模后各时间点AI均高于第I组(P＜0.01)，高峰出现在造模后28天；35～42天Ⅳ组、V组AI低于II组(P＜0.05)，III组与II组之间AI无统计学差异(P＞0.05)；III组、Ⅳ组、V组之间各时间点AI值无统计学差异(P＞0.05)。(2)踝关节下足垫厚度：第II～V组大鼠足垫厚度均于造模后14天开始增厚，21～28天达峰值，之后逐渐下降，42天足垫厚度仍高于正常对照组值(P＜0.01)；V组于28天足垫厚度低于II组(P＜0.05)，较Ⅳ组提前14天，即Ⅳ组第42天足垫厚度低于II组(P＜0.01)，III组各时间点足垫厚度与II组比较无统计学差异(P＞0.05)；V组于28天足垫厚度低于III组(P＜0.05)，较Ⅳ组提前7天，V组于35天足垫厚度低于Ⅳ组(P＜0.05)。(3)血浆CRH浓度：与I组比较，II～V组在造模后35天血浆CRH浓度水平显著下降(P＜0.01)，至造模后42天虽III～V组有所上升(P＜0.05)，但II～V组仍低于正常对照组值(P＜0.05)；与II组比较，Ⅳ～V组血浆CRH浓度在35天以后明显升高(P＜0.05)，III组在42天时高于II组(P＜0.01)，提示中剂量和高剂量在35天时显示出治疗效果，可提高AA大鼠血浆CRH水平，较低剂量提前7天；35～42天时，IV组血浆.CRH浓度高于III组，V组高于IV组且均具有统计学差异(P＜0.01)，提示高剂量治疗效果优于中剂量，而中剂量又优于低剂量。(4)血浆ACTH浓度：与I组比较，II～V组在造模后14天血浆ACTH浓度水平显著上升(P＜0.01)，28天达到高峰，后虽III～V组有所下降(P＜0.05)，但至造模后42天II～V组仍高于正常对照组值(P＜0.01)；与II组比较，V组血浆ACTH浓度在35天以后降低(P＜0.05)，Ⅳ组在42天低于II组(P＜0.01)，提示高剂量组在35天时显示出治疗效果，可降低AA大鼠血浆ACTH水平，较中剂量组提前7天，低剂量组在观察时间内未显示出治疗效果；35天时，V组血浆ACTH浓度低于III组(P＜0.05)，42天时，Ⅳ组血浆ACTH浓度低于III组，V组低于Ⅳ组(P＜0.05)，提示高剂量组起效最早，且治疗效果最佳。(5)血浆皮质酮浓度：与I组比较，II～V组在造模后14天血浆皮质酮浓度水平显著下降(P＜0.01)，28天降至最低，后虽Ⅳ～V组血浆皮质酮浓度有所上升(P＜0.05)，但至造模后42天Ⅱ～Ⅴ组血浆皮质酮水平仍低于正常对照组值(P＜0.01)；与Ⅱ组比较，Ⅳ～Ⅴ组皮质酮浓度在35天以后高于Ⅱ组(P＜0.05)，而Ⅲ组在各时间点血浆皮质酮浓度与Ⅱ组相比无统计学差异(P＞0.05)。提示中、高剂量组在35天时显示出治疗效果，可提高AA大鼠血浆皮质酮水平，而低剂量组在观察时间内未显示出治疗效果；35天时，Ⅴ组血浆皮质酮浓度高于Ⅲ组、Ⅳ组(P＜0.05)，Ⅲ组与Ⅳ组之间无统计学差异(P＞0.05)，42天时，Ⅳ组血浆皮质酮浓度高于Ⅲ组(P＜0.05)，Ⅴ组高于Ⅳ组(P＜0.01)，以上提示高剂量组治疗效果优于中剂量组。(6)外周血单个核细胞GCR表达：与正常对照组比较，AA模型组外周血单个核细胞GCR表达下降(P＜0.01)，经高剂量青藤碱治疗28天后GCR表达较模型组上升(P＜0.05)，但仍低于正常水平(P＜0.05)，提示青藤碱能够提高AA大鼠外周血单个核细胞GCR表达。(7)滑膜组织CRH、ACTH表达：与Ⅰ组比较，Ⅱ～Ⅴ组滑膜组织CRH、ACTH的表达量在各个时间点均明显升高(P＜0.01)，Ⅱ组表达最强，峰值出现于造模后28天，后逐渐下降；与Ⅱ组比较，3个治疗组都能够降低AA大鼠滑膜组织CRH、ACTH的表达量(P＜0.01)，其中高剂量青藤碱在造模后28天就显示出此作用，中剂量于造模后35天起效，低剂量起效最晚，为造模后42天；28天时Ⅴ组滑膜组织CRH、ACTH表达低于Ⅲ组和Ⅳ组(P＜0.01)，35～42天时，Ⅴ组低于Ⅳ组、Ⅳ组低于Ⅲ组(P＜0.01)，提示高剂量治疗效果优于中剂量，而中剂量又优于低剂量。(8)踝关节病理积分：造模后各个时间点，Ⅱ组病理积分均显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，其中28～42天最高；3种剂量的青藤碱均能降低病理积分，其中高剂量作用最强，35～42天V组病理积分较III组、Ⅳ组低(P＜0.05)。(9)相关性分析：踝关节下足垫厚度分别与AI、血浆ACTH浓度、滑膜组织CRH、ACTI：{表达量之间呈正相关，P＜0.01；而与血浆CRH、皮质酮浓度之间分别呈负相关，P＜0.01；血浆ACTH浓度分别与滑膜组织CRH、ACTH表达量之间呈正相关，P＜0.01；滑膜组织CRH与ACTH表达量之间呈正相关，P＜0.0 1。结论：(1)AI与踝关节下足垫厚度呈正相关，均能反映关节肿胀情况，后者更为精确、客观。(2)造模后AA大鼠血浆CRH降低，ACTH升高，皮质酮浓度降低，提示HPA轴存在功能缺陷，而且可能同时发生在下丘脑和肾上腺水平。经青藤碱治疗后各项指标有所恢复，但不能至正常水平。青藤碱治疗效果与剂量、时间相关。剂量越大，时间越长，治疗效果越好。(3)造模后AA大鼠外周血单个核细胞GCR表达降低，经高剂量青藤碱治疗后有所恢复，但不能至正常水平。提示AA发病过程中GCR表达降低，且青藤碱具有一定的治疗作用。(4)造模后从大鼠滑膜组织CRH、ACTH表达显著高于正常对照组，经青藤碱注射液治疗后有所恢复，且其治疗效果与剂量、时间相关。(5)青藤碱可以降低AA大鼠踝关节病理积分，抑制病理变化过程。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 类风湿关节炎与下丘脑-垂体-肾上腺轴

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