肺康饮含药血清对人肺癌细胞(NC-H446)细胞增殖凋亡的实验研究

摘要

目的：研究肺康饮的药物血清对人肺癌细胞（NC-H446）形态学、增殖与细胞周期和凋亡率，及其相关基因B细胞白血病/淋巴瘤-2基因（bcl-2）和p53蛋白的影响，探讨肺康饮治疗肺癌的作用及机制。
　　 方法：研究对象由中国医科大学细胞室提供的人非小细胞肺癌NC-H446细胞株，本院实验中心细胞室保存。通过给正常大鼠灌胃制备肺康饮的药物血清，设为含药血清组，正常大鼠血清设为空白血清组，研究不同血清对肺癌细胞的影响。
　　 （1）制作肺癌细胞的超薄切片，在透射电镜下观察肺癌细胞的形态学改变；
　　 （2）采用咪哇比色分析法（MTT）检测不同浓度药物血清对肺癌细胞增殖的影响；
　　 （3）采用流式细胞仪检测药物血清对肺癌细胞周期和凋亡率的影响
　　 （4）应用免疫组化方法，检测p53、bcl-2蛋白表达情况。所有数据均用SPSS12软件进行统计学处理。
　　 结果：
　　 1.培养NC-H446人肺癌细胞电镜观察，细胞核、核膜清晰可见，胞质内可见Mi、rER、Ri结构，细胞表面Vi。药物血清处理24 h，细胞在电镜下可见细胞核染色质浓淡不均，异染色质凝聚在核周边，可见核仁，细胞膜起皱呈出芽状。药物血清处理48 h，可见凋亡小体形成，小体内Mi、rER、外膜清晰，形成多个凋亡小体。
　　 2.与空白血清组比较，肺康饮药物血清作用12h既有凋亡峰（7.43％）出现，24h达高峰为26.10％，而对照组仅为6.71％，药物血清作用后，G0/G1细胞明显减少， S期细胞增多5％、10％和15％浓度组的含药血清对肺癌细胞的增殖均有明显的抑制作用（P<0.05），其中10％含药血清组的抑制率显著强于5％含药血清组（P<0.05），但15％含药血清组与10％含药血清组比较无显著性差异（P>0.05）
　　 3.与空白血清组比较，含药血清组肺癌细胞周期缩短和凋亡率明显增高，其差异具有极显著性（P<0.01）。
　　 4.免疫细胞化学研究结果：p53主要定位在细胞核，呈棕黄色颗粒，部分细胞浆也有淡染，中药组呈强阳性。bcl-2主要表现为胞浆着色呈棕黄色颗粒，中药组反应强度下降。而空白对照组未见阳性表达。
　　 5.流式细胞仪分析结果：p53、bcl-2在NC-H446人肺癌细胞株中都有不同程度的表达，药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，表达变化增强。
　　 结论：
　　 1.肺康饮药物血清具有抑制人肺癌（NC-H446）细胞株增殖作用。
　　 2.肺康饮药物血清对人肺癌细胞（NC-H446）有显著的缩短细胞周期和诱导凋亡的作用，这可能是其治疗肺癌的重要机制之一。
　　 3.肺康饮药物血清能促使凋亡小体的形成，说明此方药抑制肿瘤的作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。
　　 4.肺康饮药物血清能使p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，表达变化增强，这可能是其发挥诱导肺癌细胞凋亡的分子机制之一。

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综述 中西医结合治疗肺癌的研究进展

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