银(Ⅲ)配合物-鲁米诺流动注射化学发光新体系测定肾上腺素及多巴胺的实验研究

摘要

目的：在日常生活中，应激原经常作用机体，机体就会对应激原做出积极反应。如果应激原的作用不过于强烈，应激反应将有利于调动机体潜能，促进机体完成艰巨的任务或者更好地避开可能发生的危险，这种应激反应是有利的。如果应激原过于强烈或持久，将引起机体的功能代谢紊乱及组织器官损伤，这种应激反应对身体是有害的。创伤常常作为一种强烈的应激原作用于机体，引起机体发生胃、十二指肠黏膜的糜烂、浅溃疡、应激性心律失常、应激性心脏病、心肌梗死等疾病，这些疾病的发生及发展和机体应激时体内儿茶酚胺水平密切相关。如果能建立一种简单、快速检测血液中儿茶酚胺的浓度，以及建立儿茶酚胺于应激性疾病的相关性，进而我们通过有效干预措施对应激性疾病进行干预，降低应激性疾病的发生，保护正常的应激反应。流动注射化学发光作为一种新的检测手段，越来越广泛的应用于医学领域，它具有设备简单、灵敏度高、检测范围宽、选择性好、反应条件易于控制等优点。银（Ⅲ）配合物-鲁米诺流动注射化学发光新体系较其他鲁米诺发光体系灵敏度高、检测范围宽、检测线低，为此，我们首先建立了测定肾上腺素和多巴胺的一种简单、快速的检测方法。
　　 方法：儿茶酚胺主要有三种：多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素。本实验建立了多巴胺及肾上腺素的检测方法，
　　 本研究分为两部分：
　　 第一部分：肾上腺素标准储备液制备：准确称取一定量肾上腺素标准品，溶于二次蒸馏水中，配制成浓度为2×10-4mol/L标准储备液，于4℃冰箱中冷藏。鲁米诺溶液制备：称取0.886g鲁米诺纯品，溶于7ml1mol/L的NaOH溶液中，用二次蒸馏水定溶至250ml，制成0.020mol/L的鲁米诺溶液。二（氢过碘酸）合银（Ⅲ）配离子[Ag（HIO6）2r按文献合成。四个流路分别为载流、鲁米诺溶液、Ag（Ⅲ）溶液及样品溶液。蠕动泵起动后，混合溶液即可流入流通池，所产生的化学发光被记录下来。在基线稳定后，将肾上腺素溶液注入载流中，并与Ag（Ⅲ）和鲁米诺混合反应液流相混合。对应于不同肾上腺素浓度下的CL信号强度（峰强度减去基线信号强度）用于绘制标准工作曲线。利用银（Ⅲ）配合物-鲁米诺流动注射化学发光体系测定针剂中肾上腺素的含量。
　　 第二部分：多巴胺标准储备液制备：准确称取一定量多巴胺标准品，溶于二次蒸馏水中，配制成浓度为5.27×10-4mol/L的标准储备液，于4℃冰箱中冷藏。鲁米诺溶液制备：称取0.886g鲁米诺纯品，溶于7ml1mol/L的NaOH溶液中，用二次蒸馏水定溶至250ml，制成0.020 mol/L的鲁米诺溶液。二（氢过碘酸）合银（Ⅲ）配离子[Ag（HIO6）2]5-按文献合成。四个流路分别为载流、鲁米诺溶液、Ag（Ⅲ）溶液及样品溶液。蠕动泵起动后，混合溶液即可流入流通池，所产生的化学发光被记录下来。在基线稳定后，将多巴胺样品溶液注入载流中，并与Ag（Ⅲ）和鲁米诺混合反应液流相混合。对应于不同多巴胺浓度下的CL信号强度（峰强度减去基线信号强度）用于绘制标准工作曲线。再利用银（Ⅲ）配合物-鲁米诺流动注射化学发光体系测定针剂中多巴胺的含量。
　　 结果：采用银（Ⅲ）配合物-鲁米诺流动注射化学发光体系测定肾上腺素，流速为2.5ml/min，以去离子水作载流，鲁米诺溶液选择2.0×107mol/L，鲁米诺溶液的碱度为0.0050mol/L，Ag（Ⅲ）溶液浓度为1.0×10-5 mol/L， Ag（Ⅲ）溶液碱度为0.040mol/L，测定肾上腺素的检出限为8.0×10-10mol/L，肾上腺素的浓度在1.0×10-9-1.0×10-7 mol/L范围内，化学发光的强度（I）与其浓度（C）之间呈良好的线性关系，校准曲线的回归方程为I=-88.4+1843.6×108 C（r=0.9991）；本方法的检出限（3σ）为8.0×10-10 mol/L。对浓度为1.5×10-8 mol/L的肾上腺素进行11次平行测定，相对标准偏差2.9％。银（Ⅲ）配合物-鲁米诺流动注射化学发光新体系测定多巴胺，流速为2.5ml/min，以去离子水作载流，鲁米诺溶液选择2.0×10-7mol/L，鲁米诺溶液的碱度为0.0050mol/L，Ag（Ⅲ）溶液浓度为2.5×10-5 mol/L， Ag（Ⅲ）溶液碱度为0.040mol/L，测定多巴胺的检出限为3.0×10-11mol/L，多巴胺的浓度在1.0×10-10-4.0×10-8 mol/L范围内，化学发光的强度（I）与其浓度（C）之间呈良好的线性关系，校准曲线的回归方程为I=22.47+1139.42×109 C（r=0.9996）；本方法的检出限（3σ）为3.0×10-11 mol/L。对浓度为1.0×10-8 mol/L的多巴胺进行11次平行测定，相对标准偏差2.3％。
　　 讨论：流动注射技术、鲁米诺化学发光体系和Ag（Ⅲ）络合物联用组成的一系列测定方法，本方法较文献测定肾上腺素及多巴胺采用的高效液相色谱法、荧光法、电化学法以及其它流动注射法更加灵敏。此方法检测方法设备简单（没有光源和单色仪）、价格便宜、检出限低、线性范围宽、响应速度快以及混合样品可重复处理等，为我们进一步研究儿茶酚胺与创伤应激反应相关疾病的发生和发展研究做好了技术基础，进而对我们进行有效的干预预防疾病的发生和发展具有很大的临床意义。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分银(Ⅲ)配合物-鲁米诺流动注射化学发光新体系测定肾上腺素的实验研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分银(Ⅲ)配合物-鲁米诺流动注射化学发光新体系测定多巴胺的实验研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 流动注射化学发光法的医学应用

致谢

个人简历