P53,P21WAF1/CIP1在食管癌中的表达及与预后和烟酒史的相关性的研究

摘要

目的：食管鳞癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，其发病分布具有明显的地区差异现象，主要发病于伊朗，俄罗斯，中国等地。致病原因主要包括：饮水中亚硝酸盐含量增高、食物被黄曲霉毒素污染、吸烟、饮酒、家族遗传因素等，治疗方式以手术切除根治为主，影响预后的因素主要为肿瘤侵袭深度，淋巴结转移情况等，一些研究显示，抑癌基因，如P53，P21等的表达也与预后有关。P53基因目前被认为是最重要的抑癌基因之一，其主要功能有诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期等。P53功能的实现缘于其对上下游基因的调控，在紫外光照射，病毒感染等条件下，P53基因可能发生突变，随着P53的突变，失去了对上下游基因调控的功能。P21WAF1/CIP1是P53的一个下游基因，通过阻滞细胞周期G1/S来阻止细胞的扩增。正常情况下P53通过调控P21的表达行使其功能。但当P53突变时，导致依赖于P53的P21表达降低，其功能亦受到影响，不能阻滞细胞周期，引起细胞恶性增殖，导致肿瘤的发生。体外试验在某些肿瘤细胞株中P21 WAF1/CIP表达均呈现明显的P53依赖性，但在实体肿瘤中却并不都是如此。本实研究检测食管癌组织中P53，P21的表达情况，研究二者之间的关系，以期完善P53通路学说，并为研究P53和P21表达和患者吸烟饮酒之间的相关性。
　　方法：
　　1实验组采集河北医科大学第四医院胸外科2010年11月至2011年3月期间行手术治疗的食管癌患者的术中的新鲜肿瘤组织，术前未行放化疗治疗，术后经大体组织经病理诊断为鳞癌，残端均为阴性，手术清扫淋巴结数目均不小于6枚，共51例，其中男性患者35名，女性患者16名。对照组取自经内镜诊断的无上消化道恶性肿瘤的人食管粘膜组织，每例对照组分别取食管距门齿35cm处、25cm处、20cm处三段各1～2块，每例共3～5块，全组共32例，其中男性18例，女性14例。
　　2将取得的食管粘膜组织研磨提取蛋白，BCA法蛋白浓度测定，蛋白定量，蛋白变性，应用Western Blot技术经过制胶，电泳，转膜，封闭抗体，荧光显色等步骤，对实验组和对照组中P53和P21进行定性研究。
　　3应用统计学软件SPSS13.0，分析所得数据，所有数据以P＜0.05，为统计学上有显著差异。
　　结果：
　　1 P53试验组P53表达阳性率为72.55％，对照组中阳性率为3％。P=0.000。有显著差异。病例组中，有淋巴结转移组的P53突变率为85.19％，无淋巴结P53突变率为58.33％，P＝0.032，差异有统计学意义，肿瘤浸润全层的P53突变率为84.62％，未浸润全层的P53突变率为60.00％，P=0.049，差异有统计学意义。P53突变与患者年龄，性别，肿瘤位置和肿瘤长度无关。
　　2 P21实验组P21表达阳性率为31.37％，对照组中阳性率为53.13％。P=0.0495，差异有统计学意义。病例组中，有淋巴结转移组的P21阳性率为18.52％，无淋巴结P21阳性率为48.53％，P＝0.032，差异有统计学意义，肿瘤浸润全层的P21阳性率为15.38％，未浸润全层的P21阳性率为48.00％，P=0.009，差异有统计学意义。P21表达与患者年龄，性别，肿瘤位置和肿瘤长度无关。P53～P21 WAF1/CIP1通路正常的淋巴结转移率为0.00％，低于通路不正常的患者，但肿瘤浸润深度并无类似分布。
　　3 P53，P21相关性在P53阳性患者中(即P53基因突变者)P21表达阳性率为24.32％，在P53阴性的患者中(即P53基因正常)，P21表达阳性率为50％，两者比较P=0.154，无统计学意义。说明体内不止P53一种通路参与P21的调控，当P53发生突变后，还可能有其他通路诱导P21的表达。
　　4 P53、P21与烟酒史食管癌患者中，吸烟组的P53的突变率为87.10％，不吸烟组为50％(P=0.004)，差异有统计学意义。吸烟组P21的表达率为19.35％，不吸烟组的表达率为50％(P=0.021)，差异有统计学意义。饮酒组P53突变率和P21表达率与不饮酒组差异无统计学意义。
　　结论：
　　1在食管癌中存在P53突变，P21表达降低的现象。P53突变与P21表达降低极可能是食管癌发病的机制。吸烟可能通过引起P53突变，抑制P21表达引起抑癌基因功能丧失，进而引起食管癌的发生。
　　2 P53突变，P21表达缺失均与食管癌的浸润深度，淋巴结是否转移均有关，可作为提示预后的两个分子学指标进行检测，且在P53未发生突变，P21正常表达的食管癌患者中，其淋巴结转移的可能性较小。
　　3虽然P21是P53的下游基因，但在体内环境中，P21的表达不止依赖于P53的调控，需进一步研究P21在正常人内环境的中表达的调控。