miR-29a在球囊损伤诱导的血管内膜增生中的作用及其与冠心病之间的关系

摘要

目的:在血管损伤等刺激因素下血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)可由分化表型转化为去分化表型并得以增殖能力。VSMC的异常增殖是动脉粥样硬化、冠状动脉血管成形术后再狭窄等增殖性心血管疾病重要的病理学基础,所以抑制VSMC异常增殖是逆转血管病变和防治心血管疾病的根本措施之一。冠心病(冠状动脉心脏病)是由于脂质代谢不正常,血液中的脂质沉着在原本光滑的动脉内膜上,逐渐形成动脉粥样斑块,从而导致动脉腔狭窄,血流受阻而致病。
　　 microRNA(miRNA)是近年来新发现的一类内源性非编码小分子RNA。miRNA通过不完全互补结合到目标靶基因的3'非翻译区(3'UTR)上抑制蛋白质的翻译[1(,)2,3,4]。研究发现,miRNAs存在于人类和其他动物的血清和血浆中,其种类和数量可随着生理状况或疾病(癌症、心血管疾病、糖尿病、神经系统疾病等)而不同[5]。miR-29a是miR-29家族成员之一,最近研究显示miR-29a广泛参与心血管疾病的发生发展过程[12]。本研究一方面观察miR-29a在球囊损伤诱导的内膜增生中的作用及其分子机制。另一方面探讨miR-29a在冠心病及其心血管并发症中的作用,为冠心瘸的诊断及预后提供一个新的分子标志物。
　　 方法:用球囊损伤诱导血管内膜增生后,用Westernblot方法检测血管壁中表型标志物的表达。球囊损伤过表达miR-29a后,用HE染色观察血管内膜增生的情况,用westernbolt方法检测血管壁中相关表型标志物的表达。收集冠心病病人血液,用Real-time方法检测血液中miR-29a的表达。
　　 结果:
　　 1.球囊损伤诱导的血管内膜的增生
　　 形态学分析显示:随着损伤时间的增加,中膜内的VSMC的排列紊乱,内膜呈弥漫性增厚,管腔逐渐缩小,其中损伤14天增生最为明显(P＜0.05)。说明球囊损伤诱导血管内膜增生模型构建成功。
　　 2.球囊损伤影响血管壁中表型标志物的表达
　　 Westernblot检测球囊损伤后血管壁中CyclinE、CDK2、PCNA、UBC9及K5的表达,发现这些血管壁增殖标志物的表达随着损伤天数逐渐增加,于14天达到高峰。上述结果表明,球囊损伤诱导血管内膜增殖相关基因的表达变化与血管内膜增生程度变化一致。
　　 3.miR-29a在血管内膜增生组织中表达增加
　　 Real-timePCR结果显示:球囊损伤7天后血管组织中miR-29a的表达与假手术组相比明显增多,提示miR-29a与血管内膜的增生有一定的相关性。
　　 4.miR-29a过表达促进球囊损伤后血管内膜的增生
　　 Real-timePCR结果首先证实pAd-miR-29a和anti-miR-29a(miR-29ainhibitor)转染可以分别使miR-29a在血管组织稳定表达或抑制。HE染色结果显示,过表达miR-29a(pAd-miR-29a组)血管内膜的增生程度(3.2±0.15)显著高于pAd组(p＜0.05)。相反地,敲低miR-29a表达(anti-miR-29a组)内膜增生程度(0.15±0.03)较模型组(model14d组)(1.23±0.15)显著下降(P＜0.05)。这些结果提示,miR-29a过表达促进球囊损伤后血管内膜的增生,敲低miR-29a表达显著抑制球囊损伤诱导的内膜增生。
　　 5.过表达miR-29a促进球囊损伤诱导的增殖相关基因PCNA、CyclinD1的表达
　　 Westernblot结果显示:过表达miR-29a后可明显上调球囊损伤诱导的增殖相关基因血管壁中PCNA和CyclinD1的表达,而敲低miR-29a后表达水平明显下降。RT-PCR结果与Westernblot结果相一致。这提示,过表达miR-29a促进球囊损伤诱导的血管内膜增生可能与促进增殖相关基因PCNA和CyclinD1的表达有关。
　　 6.过表达miR-29a促进血管壁中K1f5的表达
　　 Westernblot结果显示:过表达miR-29a(pAd-miR-29a组)后较pAd组K1f5的表达显著增多;抑制miR-29a表达(anti-miR-29a组)K1f5表达较模型组(model14d组)组明显减少。RT-PCR结果与Westernblot结果相一致,这表明miR-29a可能通过上调转录因子K1f5的表达而促进增殖相关基因的表达。
　　 7.冠心病患者体内miR-29a的表达
　　 Real-timePCR结果显示:miR-29a的水平在冠心病患者血液中(2.22±0.09mmol/L)与正常人(6.92±0.12mmol/L)相比明显下降(P＜0.01)。
　　 8血清中miR-29a含量与冠心病危险因素的相关性分析
　　 经多因素Logistic回归分析,通过偏相关分析控制了年龄、吸烟等混杂因素后,发现血清中miR-29a与高血脂与总胆固醇等心血管危险因素呈明显正相关,而与其他危险因素无关。
　　 结论:
　　 1.miR-29a过表达促进球囊损伤诱导的血管内膜增生。
　　 2.miR-29a促进血管内膜增生的分子机制与上调转录因子K1f5表达,进而活化增殖相关基因表达有关。
　　 3.循环血中miR-29a的表达在冠心病患者中显著下降。
　　 4.循环血中miR-29a的表达与高血脂和总胆固醇等心血管危险因素呈明显负相关,而与其他危险因素无关。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 miR-29a促进球囊损伤诱导的血管新生内膜形成及其分子机制

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第二部分 miR-29a与河北地区弥漫性冠状动脉病变的相关性分析

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述

致谢

个人简历