益气养阴清热利湿方对IgA肾病大鼠肾脏的保护作用及其对MMP-9/TIMP-1的影响

摘要

目的:通过观察益气养阴清热利湿方对IgA肾病模型大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、血清白蛋白及肾组织中基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制物-1表达水平的影响，探讨该中药方对IgA肾病的肾脏保护作用及其可能的作用机制，为临床上治疗IgA肾病提供实验依据。
　　方法:健康雄性清洁级SD大鼠40只随机分为正常对照组、模型组、贝那普利组及中药组，每组各10只。适应性饲养1周后，除正常对照组大鼠外，均给予牛血清白蛋白400 mg/kg隔日灌胃6周;每周皮下注射蓖麻油0.5 ml+四氯化碳0.1ml1次，共9周;第6、8周末尾静脉注射脂多糖0.05 mg复制IgA肾病大鼠模型。正常对照组大鼠予以等量(4 ml/kg)的蒸馏水隔天灌胃，共持续6周;皮下注射蓖麻油0.6 ml，每周1次，共持续9周;于第6、8周尾静脉注射氯化钠溶液0.2 ml。于实验开始后第10周给予中药组大鼠益气养阴清热利湿中药(15.75 g/kg/d)灌胃，给予贝那普利组大鼠盐酸贝那普利片(1.05 mg/kg/d)灌胃，正常对照组、模型组实验大鼠均灌服等量蒸馏水，连续灌胃8周。分别于造模前、第7周、9周、13周、17周末收集各组大鼠24h尿液，检测24h尿蛋白定量。17周末用水合氯醛麻醉大鼠，股动脉取血，离心，检测血清Scr、BUN、ALB含量，留取肾脏组织，行HE、PASM染色及免疫荧光检查，观察大鼠肾小球的病理变化，免疫组化及聚合酶链式反应测定肾组织中MMP-9、TIMP-1水平。
　　结果:
　　1同一时期各组实验大鼠24h尿蛋白定量的比较
　　造模前，正常对照组、模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量相比均无显著性差异（P＞0.05）。
　　第7周末，模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与正常对照组相比均明显升高（P＜0.05）;模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量相比无显著性差异(P＞0.05)。
　　第9周末，模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与正常对照组相比均明显升高(P＜0.05);模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量相比无显著性差异(P＞0.05)。
　　第13周末，模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与正常对照组相比均明显升高(P＜0.05);贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与模型组相比降低(P＜0.05);贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量相比无明显差异(P＞0.05）。
　　第17周末，模型组、贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与正常对照组相比均明显升高(P＜0.05);贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量与模型组相比降低(P＜0.05);贝那普利组、中药组实验大鼠24h尿蛋白定量比较无明显差异(P＞0.05）。
　　2益气养阴清利湿热方对实验IgAN大鼠Scr、BUN、ALB的影响
　　正常对照组、模型组、贝那普利组、中药组血清Scr、BUN、ALB比较:各组间差异均不明显(P＞0.05)。
　　3肾脏病理形态学观察
　　3.1光学显微镜观察
　　正常对照组实验大鼠肾小球结构完整，肾小球系膜、基质未见明显异常改变;模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖、系膜基质积聚，部分肾小球囊腔粘连，肾小球毛细血管管腔挤压变窄;贝那普利组、中药组大鼠肾小球系膜细胞轻度增生和系膜基质增宽，与模型组相比，病变减轻。
　　3.2免疫荧光观察
　　正常对照组实验大鼠肾小球系膜区无免疫复合物沉积，模型组可见肾小球系膜区颗粒状或团块状荧光绿色免疫复合物沉积，贝那普利组、中药组大鼠肾小球系膜区也有免疫复合物不同程度的沉积，但较模型组轻。
　　4免疫组织化学方法检测实验IgAN大鼠肾脏组织中MMP-9和TIMP-1的表达
　　正常对照组实验大鼠肾脏MMP-9阳性表达;与正常对照组比较，模型组、贝那普利组和中药组实验大鼠肾脏MMP-9表达明显降低（P＜0.05）;与模型组相比，两治疗组均升高（P＜0.05）;两治疗组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　正常对照组实验大鼠肾脏TIMP-1少量表达;与正常对照组相比，模型组及各治疗组TIMP-1表达均明显增高（P＜0.05）;与模型组相比，各治疗组TIMP-1表达均降低（P＜0.05）;两治疗组之间无明显差异(P＞0.05)。
　　5 RT-PCR方法检测实验IgAN大鼠肾脏组织中MMP-9 mRNA和TIMP-1mRNA的表达
　　与正常对照组相比，模型组及各治疗组均明显MMP-9 mRNA水平明显降低(P＜0.05);与模型组比较，各治疗组MMP-9 mRNA表达均升高(P＜0.05），且治疗组之间MMP-9 mRNA表达无统计学差异(P＞0.05)。
　　与正常对照组相比，模型组及各治疗组TIMP-1mRNA表达均明显增高(P＜0.05）;与模型组相比，各治疗组TIMP-1 mRNA表达均明显降低(P＜0.05)，两治疗组间无统计学差异(P＞0.05)。
　　结论:
　　1益气养阴清热利湿方能明显降低IgA肾病实验大鼠24小时尿蛋白定量，此疗效与盐酸贝那普利相当。
　　2益气养阴清热利湿方能有效减轻肾组织的病理损害，延缓IgA肾病的进展。
　　3益气养阴清热利湿方能够显著提高MMP-9的表达，降低TIMP-1表达，提示其对IgA肾病的肾脏保护作用可能与其纠正MMP-9/TIMP-1失衡有关。

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结论

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综述 IgA肾病血尿的中医认识与治疗

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