白藜芦醇对人肾癌786-0细胞周期、凋亡及凋亡相关基因PDCD5表达的影响

摘要

目的：探讨白藜芦醇对人肾癌786-0细胞凋亡相关基因PDCD5 mRNA、蛋白表达及其细胞周期、增殖的影响。
　　 方法：人肾癌786-0细胞，经复苏孵育，体外培养至对数生长期传代分为不同的实验组，分别用12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜芦醇(RES)分别处理肾癌786-0细胞24h、48h、72h。倒置显微镜下观察细胞形态学的改变；应用免疫细胞化学法和原位杂交技术检测各组细胞中PDCD5蛋白和mRNA的表达情况；采用流式细胞技术检测各组细胞的增殖情况；应用TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。
　　 结果
　　 1.倒置显微镜下观察人肾细胞癌786-0细胞发现：细胞外形为梭形，圆形或多边形。细胞轮廓不模糊。说明人肾细胞癌786-0细胞生长状态较好。经过白藜芦醇处理过24h后的人肾细胞癌786-0细胞，细胞数目明显减少，细胞的体积缩小细胞核发生缩小、变圆等现象。
　　 2.免疫细胞化学结果：经过12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4种不同浓度的白藜芦醇(RES)处理人肾癌786-0细胞24h、48h、72h后PDCD5蛋白表达开始升高。25μmol/L白藜芦醇作用24h后，PDCD5蛋白表达状况为：2.90±0.13，3.08±0.21，3.23±0.21与空白对照组(1.10±0.19，1.13±0.21，1.42±0.25)相比，差异有显著性，(P<0.05)。继续升高药物浓度PDCD5蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)，且当作用时间达到24小时后，继续增加作用时间，PDCD5蛋白表达增高之间的差异也没有显著性(P>0.05)。
　　 3.原位杂交结果：12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4种不同浓度的白藜芦醇处理人肾癌786-0细胞1d、2d、3d后PDCD5 mRNA的表达就开始升高。当白藜芦醇浓度达到25μmol/L，PDCD5 mRNA的表达情况为3.35±0.23，3.40±0.31，3.60±0.26与空白对照组相比(1.47±0.27，1.78±0.38，1.88±0.31)(P<0.05)。且当作用时间达到24小时后，继续增加作用时间，PDCD5mRNA表达增高之间的差异也没有显著性(P>0.05)。
　　 4.流式细胞技术检测细胞周期的变化：人肾癌786-0细胞在经12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜芦醇(RES)处理24h后，25μmol/L白藜芦醇处理组G1期细胞的比例为：65.28±3.10，G2期细胞的比例为9.67±0.43较空白对照组的细胞比例：75.23±2.58、11.35±2.37有所下降，且差异有统计学意义(P<0.05)。25μmol/L白藜芦醇处理组S期的细胞比例为24.79±3.72较空白对照组的细胞比例13.17±1.36有所升高，且差异有统计学意义(P<0.05)，继续升高药物浓度各组间的差异无显著性(P>0.05)。
　　 5.TUNEL结果：25μmol/L白藜芦醇处理组人肾癌786-0细胞凋亡的比例为：6.01±0.59，较空白对照组的细胞凋亡比例：0.73±0.25有所下降，且差异有统计学意义(P<0.05)。当白藜芦醇的作用时间达到24小时后，继续增加作用时间白藜芦醇处理组人肾癌786-0细胞凋亡的比例分为：5.90±0.50，5，97±0.25，较空白对照组的细胞凋亡比例：0.90±0.20，，1.10±0.20升高明显，差异有统计学意义(P<0.05)，但与6.01±0.59相比，差异无显著性(P>0.05)。
　　 结论
　　 1.白藜芦醇可上调入肾癌786-0细胞中PDCD5蛋白和mRNA的表达。
　　 2.人肾癌786-0细胞在受到白藜芦醇的作用后，细胞周期发生改变，其中S期的细胞比例升高，G1期和G2期细胞比例下降。
　　 3.白藜芦醇可诱导人肾癌786-0细胞发生细胞凋亡。