人促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元的抗凋亡作用及其与NF-KB的相关性研究

摘要

目的:研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用，主要观察EPO对神经细胞凋亡及脑缺血再灌注后脑梗死体积的影响，并探讨NF-KB的表达与这种影响之间的关系。 方法:采用改良法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将72只健康Sprague-Dawleg雄性3月龄大鼠，体重250-330g随机分为六组，分别为：1假手术组(A组)，2缺血再灌注非治疗组(B组)。3缺血再灌注治疗组(又分为C,D,E,F 4组，分别在缺血前30分钟及再灌注后2，6，12小时腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhu-EPO)3000Iu/kg)，每组12只。模型成功后，各组随机取6只大鼠快速断头取脑，距额极2mm向后连续等距取冠状脑片7片，做TTC染色脑梗死体积变化；其余动物开胸暴露心脏，经左心室用生理盐水100ml，4﹪多聚甲醛200ml灌注2小时，断头取脑，自视交叉前2mm向后连续冠状切片5块，让隔2mm。用4﹪多聚甲醛液固定4小时，常规石蜡包埋，每例蜡块做6张切片，片厚3um，用HE染色观察其病理变化，免疫组织化学观察EPO、NF-KB的表达，TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果假手术组和缺血再灌注组各1只(分别在6h，12h时间点)，促红细胞生成素实验12h组各有一只脱失，其余大鼠均纳入结果分析，具体结果如下：1 TTC染色使正常脑组织染成红色，缺血灶染成苍白色，观察的脑梗塞灶位于左侧大脑半球皮质和基底节，成苍白色，与大脑中动脉(MCA)供血区域一致，未缺血部分成红色，说明模型制作成功，C,D,E组较F组及B组缺血体积明显减小，差异有统计学意义。2 HE染色光镜观察：与假手术组(A组)相比，C，D，E组未见明显病理性改变，B,F显示病死灶位于左侧，梗死区神经元少或消失，缺血区淡染，细胞数明显减少，但结构尚存，缺血周边细胞体积减小，核固缩，胶质红染，细胞间隙增大。3 EPO的表达：A组见少量EPO阳性表达细胞，C，D，E，组较F,B组表达明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)．4凋亡细胞：再灌注治疗组中C,D,E及假手术组A组仅见少量凋亡阳性表达细胞，B,F组可见大量凋亡阳性细胞，差异有统计学意义(P<0.05)．5 NF-кB的表达：C，D，E组NF．KB表达较A，B，F组明显增多，差异有显著性意义(P<0.05)．6．EPO的表达与凋亡阳性细胞数呈负相关，相关系数τ=-0.409，与NF-кB表达呈正相关τ=0.471，NF-кB的表达与凋亡阳性细胞数呈负相关，相关系数τ=-0.410。 结论 1 在正常大鼠脑中有少量EPO的表达，大鼠局灶性脑缺血2h再灌注24h后中枢神经系统内源性EPO表达将增加。外源性EPO在缺血缺氧损伤后可以通过血脑屏障进入中枢。 2 中枢神经系统内的EPO表达具有脑保护作用，并存在作用时间窗。 3 抗凋亡作用是：EPO脑保护作用的一种重要机制，可能是通过NF-KB的作用而实现．

目录

新乡医学院学位论文原创性声明及学位论文版权使用授权书

摘要

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表文章情况

致谢

个人简历