红参作为益生元调节在抗生素作用下小鼠肠道菌群的研究

摘要

红参富含多糖等多种营养成分，具有益气补血、抗肿瘤和提高免疫力等功效。目前，对红参的研究主要聚焦在提取、纯化和鉴定以及药理与临床应用等方面，其作为益生元所进行的益生功能方面的研究鲜有报道，大大限制了红参作为潜在的新型益生元的应用。本试验以红参为试验材料，体外评价红参潜在的益生功能及其体内对肠道菌群失调小鼠的调节作用。
　　体外试验结果如下:
　　1、通过体外耐受性试验表明鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌均具有潜在益生功能;
　　2、通过体外增菌试验证实红参具有较好的益生作用，即红参促进鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌增殖。
　　在此基础上，进一步研究红参对小鼠肠道菌群的影响。体内试验结果如下:
　　1、分别给予小鼠无菌生理盐水(CK)和氨苄青霉素钠(K)4天，ERIC-PCR指纹图谱和主成分分析显示小鼠肠道菌群失调模型建立成功。
　　2、K中选取12只小鼠进行自然恢复，环境因子分析显示小鼠肠道微生物经14天的自然恢复已恢复到正常水平。
　　3、K组选取24只小鼠分为2组，分别给予鼠李糖乳杆菌菌悬液(L)109CFU/mL和保加利亚乳杆菌菌悬液(A)108CFU/mL。门水平物种组成分析显示CK、A和L中占优势的物种是拟杆菌门和厚壁菌门，K中优势物种为拟杆菌门和变形菌门。属水平分析显示，小鼠灌胃乳酸菌可以显著增加乳酸菌属和艾克曼菌的相对丰度并降低克雷伯氏杆菌和大肠埃希菌相对丰度，且鼠李糖乳杆菌效果优于保加利亚乳杆菌。
　　4、剩余K组小鼠分为2组，分别给予红参提取液(H)4g/(Kg·BW)和低聚木糖(X)0.23g/(Kg·BW)。门水平物种组成分析显示厚壁菌门在H、X和CK中均显著高于K，与低聚木糖相比，红参具有增加F/P比例的作用。属水平分析显示，与低聚木糖相比，红参不仅促进了有益微生物生长也抑制了有害菌增殖，并且促乳酸菌属增殖的效果优于低聚木糖。
　　5、ERIC-PCR、Southern-blot和宏基因组测序技术总体分析显示小鼠可以自然恢复到正常水平，但给予红参、低聚木糖和乳酸菌能加速小鼠肠道菌群的恢复，且增殖乳酸菌属效果为红参＞鼠李糖乳杆菌＞保加利亚乳杆菌＞低聚木糖。
　　本研究在体外评估红参益生功能的基础上，应用ERIC-PCR、southern-blot和宏基因组测序技术研究红参对抗生素作用下小鼠肠道菌群的调节作用，加深了人们对红参益生功能的了解，为从益生元角度开发中草药资源奠定基础。

目录

声明

摘要

1．1 研究目的与意义

1．2 红参概述

1．2．1 研究现状及存在问题

1．3 肠道微生物研究进展

1．4 益生菌

1．4．1 益生菌生理功能

1．4．2 存在问题

1．5 益生元

1．5．1 益生元生理功能

1．5．2 应用现状

1．6 肠道菌群分子生物学分析技术

1．7 本研究主要内容

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验菌株

2．1．3 实验材料

2．1．4 培养基

2．1．5 主要试剂

2．1．6 主要仪器设备

2．1．7 实验试剂及药品配置

2．2 试验方法

2．2．1 鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌体外耐受性检测

2．2．2 益生元对乳酸菌体外增菌效果的研究

2．2．3 小鼠肠道菌群失调模型的建立及其自然恢复

2．2．4 乳酸菌对小鼠肠道菌群的干预

2．2．5 红参对小鼠肠道菌群的干预

2．2．6 基于ERIC-PCR、Southern-blot和宏基因组学分析小鼠肠道菌群变化

3 结果与分析

3．1 鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌体外耐受性检测

3．2 益生元对乳酸菌体外生长的影响

3．2．1 菌株生长曲线的测定

3．2．2 红参多糖浓度的测定

3．2．3 益生元对乳酸菌体外生长的研究

3．3 小鼠肠道菌群失调模型的建立及其自然恢复

3．3．1 小鼠肠道菌群失调模型的建立

3．3．2 小鼠肠道菌群失调模型的自然恢复

3．4 基于宏基因组学分析乳酸菌对小鼠肠道菌群的影响

3．5 基于宏基因组学分析红参对小鼠肠道菌群的影响

3．6 基于ERIC-PCR、Southern-blot和宏基因组学分析小鼠肠道菌群变化

3．6．2 基于Southern-blot分析小鼠肠道菌群变化

3．6．3 基于宏基因组学分析小鼠肠道菌群变化

4 讨论

4．1 鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌体外耐受性研究

4．2 益生元对乳酸菌体外生长的影响

4．3 鼠李糖乳杆菌和保加利亚乳杆菌对小鼠肠道菌群的影响

4．4 红参对小鼠肠道菌群的影响

4．5 红参、低聚木糖和乳酸菌对小鼠肠道菌群的影响

5 结论

参考文献

在校期间发表的学术论文

作者简介

致谢