基因枪轰击法介导抗逆基因LEA的旱稻转化

摘要

众所周知，地球表面虽72％被水覆盖，淡水资源却仅占所有水资源的0.75％，其中又大部分以不能被直接利用的固体形式存在，不少地区仍存在饮水危机。农业为水资源消耗的一大巨头，在中国农业用水占总用水量的70％在不减少作物产量的情况下提高农作物的耐受性和抗逆性，对水资源问题的解决和全球粮食的供给有很大程度上的缓解。二十世纪七十年代转基因技术应运而生对物种种质资源的改良带来了福音。
　　水稻是世界上主要的粮食作物之一，旱稻又称陆稻，水稻的变异类型，能适应生长于旱地坡地及干旱环境下，以上因素导致旱稻能节约大量的农业用水，从而降低生产成本进而提高经济效益，本课题选用“旱稻2号”为实验材料利用基因枪轰击法为主要转化方法转入LEA（late embryogenesis abundant proteins）家族的一员8704。课题主要研究了“旱稻2号”胚性愈伤的培养并对基因枪轰击法针对旱稻的转化条件进行了研究，通过实验获得了“旱稻2号”合适的表面消毒的方法，及培养基成分及适宜胚性愈伤诱导的最佳激素浓度，及基因枪轰击转化时转化效率高的金粉浓度和轰击参数。转化后通过浓度梯度实验得出适合“旱稻2号”筛选的最佳草甘膦浓度，及分化所需各激素浓度，移栽最适状态。通过提取转基因植株叶片DNA的提取，经分子水平检测得到阳性植株。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 旱稻

1．1．1 旱稻的抗旱机理

1．1．2 旱稻与水稻相比的优势

1．2 植物转基因技术

1．2．1 植物转基因发展

1．2．2 植物转基因方法

1．3 基因枪轰击法

1．4 LEA

1．4．1 LEA蛋白的定义

1．4．2 LEA的分类

1．4．3 LEA结构和功能

1．5 课题来源

1．6 研究内容和目的

1．6．1 课题的研究内容

1．6．2 课题的研究目的

第2章 旱稻愈伤组织的获得

2．1 概述

2．2 实验用品

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验试剂

2．2．3 实验设备与仪器

2．3 实验方法

2．3．1 培养基的配制

2．3．2 种子表面消毒

2．3．3 旱稻愈伤组织的诱导及培养

2．3．4 数据处理

2．4 结果分析与讨论

2．4．1 种子的消毒结果

2．4．2 不同培养基对旱稻愈伤组织诱导的影响

2．4．3 愈伤组织

2．4．4 讨论

2．5 本章小结

第3章 基因枪轰击转化法

3．1 概述

3．2 实验用品

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验试剂

3．2．3 实验设备与仪器

3．3 实验方法

3．3．1 实验所需培养基的配制

3．3．2 基因枪轰击前的准备工作概述

3．3．3 轰击步骤

3．3．4 基因枪轰击后处理

3．4 结果分析与讨论

3．4．1 基因枪轰击前渗透压处理对旱稻转化的影响分析

3．4．2 不同金粉和质粒量的组合对分化的影响

3．4．3 轰击参数组合对旱稻转化的影响

3．4．4 轰击后愈伤恢复对分化的影响

3．4．5 讨论

3．5 本章小结

第4章 抗性愈伤组织筛选与分化

4．1 概述

4．2 实验用品

4．2．1 实验材料

4．2．2 实验药品

4．2．3 实验设备

4．3 实验方法

4．3．1 草甘膦用量的确定

4．3．2 转化后愈伤组织的筛选

4．3．3 预分化

4．3．4 分化

4．3．5 生根培养

4．3．6 壮苗

4．3．7 移栽

4．4 结果与讨论

4．4．1 草甘膦筛选浓度的确定

4．4．2 预分化处理后对分化的影响

4．4．3 分化情况

4．4．4 转基因苗的生根壮苗移栽

4．4．5 讨论

4．5 本章小结

第5章 转基因旱稻DNA水平的鉴定

5．1 概述

5．2 实验材料、试剂及仪器

5．2．1 实验材料

5．2．2 实验试剂

5．2．3 主要溶液配制

5．2．4 主要仪器

5．3 实验方法

5．3．1 DNA的提取

5．3．2 PCR鉴定转基因植株

5．4 实验结果

5．4．1 样本DNA获得

5．4．2 PCR鉴定结果

5．4．3 测序结果

5．5 讨论

5．6 本章小结

结论

附录

参考文献

致谢