多色流式细胞术在急性淋巴细胞白血病微小残留病检测中的应用

摘要

急性淋巴细胞白血病(ALL)患者经系统化疗后的缓解率有了很大的提高，但仍有20％左右的患者预后较差，最终死于复发。微小残留病(MRD)是导致ALL复发的根本原因。流式细胞仪是检测MRD的技术之一，可检测到更低指数级的白血病细胞，但B系淋巴细胞白血病患者治疗后增生期骨髓中伴有正常的B系祖细胞，因此检测较复杂，需寻找多个白血病相关免疫表型(LAIP)进行流式细胞术(FCM)分析，标记以提高检出率，更加准确地评估患者的预后和复发趋势，为临床干预提供参考。
　　目的：
　　探讨多色流式细胞仪对检测急性B系淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留的方法及临床应用价值。
　　方法：
　　选择我院确诊为B-ALL的患者71例作为研究对象，初诊时采用三色FCM和两组六色抗体组合对患者进行免疫分型，完全缓解(CR)后于化疗第33天、3个月、6个月、9个月、12个月抽取骨髓作为标本，根据诊断时的免疫分型，检测MRD水平。采用Cox回归分析复发的影响因素。
　　结果：
　　(1)三色与多色FCM免疫分型结果比较:三色B系相关抗原CD19、CD20、CD22阳性率分别为65.77％、40.85％、100.00％，六色分别为100.00％、40.85％、98.59％;三色FCM分T系相关抗原CD5阳性率4.23％，六色为6.82％;三色髓系相关抗原CD13、CD33阳性率分别为22.54％、35.21％，六色为25.35％、33.80％;三色非系列相关抗原CD10、CD34阳性率分74.65％、83.10％，六色为78.87％、84.51％;差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　(2)FCM定期检测情况:33天时标危组、高危组MRD≤10-4的构成比例是82.35％、62.07％;3个月时分别为76.47％、53.85％;6个月时分别为70.59％、50.00％;9个月时分别为55.17％、45.00％;12个月时分别为57.14％、42.11％，标危组MRD≤10-4的构成比例均高于高危组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　(3)MRD水平与复发的关系:第33天63例患者进行检查，MRD≥10-4与MRD＜10-4患者复发率分别为41.18％和6.52％;3个月时60例患者进行检查，复发率分别为35.00％和0.00％;6个月时58例患者进行检查，复发率分别为41.67％和0.00％;9个月时49例患者进行检查，复发率分别为29.16％和0.00％;12个月时47例患者进行检查，复发率分别为13.04％和0.00％;各时点MRD≥10-4患者复发率均高于MRD＜10-4患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。Cox回归分析显示，33天MRD≥10-4、3个月MRD≥10-4、危险分层高危及My表达阳性是B-ALL患者诱导缓解后复发的危险因素(P＜0.05)。
　　结论：
　　(1)多色FCM所用的抗体总数较少，但通过多重设门，与三色流式细胞术免疫分型基本相同。而且多色FCM同一试管中可同时检测多种抗原，并根据初诊免疫分型时检测出的LAIP调整抗体组合，有利于获得B-ALL患者化疗缓解后的MRD水平。
　　(2)在B-ALL患者化疗缓解后33天、3个月时多色FCM检查MRD＞10-4提示复发风险增加，可作为判断预后、复发并指导临床个体化治疗的手段。

目录

声明

摘要

前言

1 材料与方法

1．4 检测方法

1．5 统计学方法

2 结果

2．3 对照组与病例组骨髓FCM检测结果

2．4 应用多色FCM监测MRD

2．5 MRD水平与B-ALL复发的关系

2．6 相关性分析

3 讨论

3．2 MRD的定义及FCM检测MRD对治疗的指导作用

3．3 多色FCM在MRD监测中的应用及临床意义

4 结论

附图

参考文献

综述 流式细胞仪检测B系淋巴细胞白血病微小残留的研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢

个人简历