木豆的离体培养及遗传变异的分子检测

摘要

本文以桂木1号木豆（Cajanus cajan L.）为材料，对其离体快繁、适宜于遗传工程的再生体系、以及离体材料的遗传稳定性等方面进行了探讨，以期为资源的离体快繁、离体保存和遗传转化等提供了技术平台。取得以下结果：
　　1、离体再生体系的建立与优化
　　无菌系的建立，用75％酒精浸泡30s后，分别用0.1％升汞溶液和10％NaClO3溶液采用不同时间进行灭菌。随后接种在MS+BA（0.5mg/L）+IBA（0.1mg/L）+蔗糖（3.0％）+琼脂（0.7％）培养基上，得出最佳处理方式为10％NaClO3溶液灭菌15min其污染率8％，萌发率84.7％。外植体类型、年龄、培养基中生长调节物质（PGR）种类及含量等因子对木豆离体再生有很大影响。选用萌发后种子的子叶节接种于EC6+BA（4.0mg/L）+IBA（0.1mg/L）+蔗糖（3.0％）+琼脂（0.7％）的培养基中，获得了较高的不定芽再生频率为91.7％。不定芽增殖培养最佳培养基为EC6+BA（4.5mg/L）+IBA（0.1mg/L）+KT（0.4mg/L）+AdS（90mg/L）+蔗糖（3.0％）+琼脂（0.7％），增殖系数达到（4.6）。生根培养以1/2MS+IBA（0.2mg/L）+蔗糖（2.0％）+琼脂（0.7％）培养基上效果最佳。炼苗约15d后移栽，移栽成活率82.5％。
　　2、愈伤组织培养
　　外植体类型、基本培养基、生长素种类及浓度对木豆愈伤组织的诱导有一定影响。以子叶节接种在B5+BA（1.0mg/L）+KT（1.0mg/L）+蔗糖（3.0％）+琼脂（0.7％）的培养基中诱导愈伤组织效果较好，出愈率为52.7％。
　　3、离体材料的常温保存
　　把木豆试管苗接种在1/4MS+蔗糖（1.5％）+琼脂粉（0.7％）培养基中添加3.0mg/L脱落酸（ABA）进行常温保存效果最好，苗生长高度为3.3cm，芽苗生长缓慢,较健壮，叶绿，约50d继代一次。
　　4、离体材料遗传变异的分子检测
　　采用60个引物对木豆田间材料、离体材料进行ISSR检测，结果表明，试管苗在继代5代内及第5代内20个株系的DNA进行检测，均未检测到变异。因此在所有引物检测范围内，木豆试管苗在5代内DNA分子上没有发生变异。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

第一章 前 言

1 课题的提出

2 研究进展

3 本研究的目的和内容

第二章 木豆的离体培养及遗传变异的分子检测

1 材料与方法

2 结果与分析

3 结论与讨论

致谢

参考文献

附 录

图版及说明

声明