hK7增加DU145体外侵袭力并改变其细胞生长形态

摘要

背景：本课题组在前期一个国家自然科学基金资助项目的研究中发现：KLK7在有或无间质共培养的良性前列腺增生上皮细胞中差异表达KLK7编码的蛋白为hK7。hK7与PSA都是分泌性、具有糜蛋白酶样活性的丝氨酸蛋白酶，两者的编码基因都属于kallikrein基因家族，hK7最早被报道在皮肤角质层中表达，可促进皮肤脱屑过程。其主要机制是hK7通过降解细胞间的连接结构，降低细胞附着力，从而使表皮细胞脱落。肿瘤发生侵袭转移的起点或者说重要环节之一就是首先癌细胞从原发部位脱落。hK7对前列腺癌侵袭转移等恶性表型是否有影响，目前尚未见有报道。目的：研究hK7对前列腺癌细胞恶性表型的影响，探索hK7的潜在临床应用价值。 方法： 1．首先利用基因克隆等分子生物学技术构建hK7的重组表达载体pcDNA3.1-KLK7： 2．然后重组载体稳定转染前列腺癌细胞系22RV1及DUl45，在前列腺癌细胞中稳定表达hK7蛋白，获得的研究对象用于表型测定和观察； 3．最后，测定并观察hK7对前列腺癌细胞系生长、侵袭、克隆形成能力和细胞形态等肿瘤相关表型的影响。 结果： 1．成功构建hK7的重组表达载体； 2．在前列腺癌细胞系中稳定表达hK7； 3．表达hK7对前列腺癌细胞系生长增殖无显著影响； 4．表达hK7对DU145体外形成克隆的个数无明显影响； 5．hK7显著增强DU145体外侵袭基质胶的能力； 6．初步结果表明，hK7促使DU145发生类上皮间质转化(类EMT)的形态学改变。 结论：hK7增加DUl45细胞侵袭能力，这种恶性表型改变可能是hK7通过本身糜蛋白酶样水解活性直接降解基质胶引起，也可能与hK7促使DU145发生上皮间质转化样的形态学改变有关。hK7作为前列腺癌潜在治疗靶点和血清学标记物的潜在临床应用价值有待进一步研究。

目录

声明

摘要

前言

第一部分：构建人类组织激肽释放酶hK7的真核表达重组载体

材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第二部分：转染、筛选及鉴定稳定表达hK7的人类前列腺癌细胞

1材料与方法

2结果

3 讨论

4小结

第三部分：hK7对前列腺癌细胞系体外生物表型影响

1材料与方法

2实验结果

3讨论

4结论

参考文献

综述：前列腺慢性炎症可能是诱发前列腺癌的重要危险因素

致谢