老鼠簕生物碱A对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠细胞外基质及相关细胞因子表达的影响

摘要

目的:本课题组已成功合成并鉴定了老鼠簕生物碱A（HBOA，即4-羟基-苯并恶唑-2-酮），在前期研究基础上，本研究从细胞外基质以及相关细胞因子方面探讨HBOA对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用，并探讨其作用机制。实验以及临床上均证明，肝纤维化具有可逆性。因此，寻找既安全又有效的药物来逆转肝纤维化，在肝脏疾病领域非常具有研究价值。
　　方法:将雄性SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为：（1）正常对照组，灌胃2 mL/kg生理盐水。（2）肝纤维化模型组，灌胃50％CCl4油溶液2 mL/kg，诱导化学性肝纤维化模型。连续造模8周，经病理结果证实肝纤维化造模成功后，将肝纤维化大鼠随机分为：模型对照组、阳性对照组（秋水仙碱）、HBOA高剂量组、HBOA低剂量组。从第9周开始，给药干预，连续4周，每天一次。阳性对照组灌胃秋水仙碱混悬液0.4 mg/kg；HBOA高剂量组灌胃老鼠簕生物碱A溶液100 mg/kg，HBOA低剂量组则灌胃50 mg/kg老鼠簕生物碱A溶液；此外，正常对照组和肝纤维化模型对照组灌胃10 mL/kg的0.6% CMC-Na溶液。为预防大鼠肝纤维化自动逆转，给药干预期间，除正常对照组灌胃相应体积生理盐水外，其余各组大鼠继续给予灌胃50% CCl4溶液每周2次。末次给药24小时后，对已禁食12h后的大鼠麻醉后采集腹主动脉血。分离上层血清，并取部分上层血清用于全自动生化分析仪检测血清谷丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性；用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测大鼠血清中透明质酸（HA）、粘连蛋白（LN）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的含量。大鼠颈椎脱臼处死，采集肝组织、称重并计算肝指数；制作肝组织病理学切片，光镜下观察HE染色、Masson三色染色肝脏组织病理，计算肝纤维化评分；免疫组织化学法检测肝组织I型胶原蛋白（COL-I）、III型胶原蛋白（COL-III）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的蛋白表达；RT-PCR法检测大鼠肝组织COL-I、COL-III、TNF-α、TGF-β1、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPARγ）、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）的基因表达。
　　结果:血清生化指标结果显示，与正常对照组比较，模型对照组血清ALT、AST的活性有明显升高（P<0.05）；与模型对照组比较，HBOA-H组、HBOA-L组血清ALTA、AST的活性均有显著降低（P<0.01或P<0.05）。与正常对照组比较，模型对照组血清HA、LN含量明显增多（P<0.01）；与模型对照组比较，HBOA-H组、HBOA-L组血清HA、LN含量均有显著减少（P<0.01或P<0.05）。与正常对照组比较，模型对照组血清TNF-α、TGF-β1含量明显升高(P<0.01);与模型对照组比较，HBOA-H组、HBOA-L组能显著降低大鼠血清中TNF-α、TGF-β1的含量（P＜0.05或P＜0.01）。
　　病理结果显示，HBOA能明显降低CCl4诱导的大鼠肝组织纤维化程度。与正常对照组比较，模型对照组的肝脏指数增大明显（P＜0.01）；与模型对照组比较，HBOA-H组、HBOA-L组的肝脏指数明显降低（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学法检测结果显示，与正常对照组比较，模型对照组COL-I、COL-III、TIMP-1的蛋白表达明显升高，显色加深（P<0.01），而MMP-9的蛋白表达明显低于正常组（P<0.05）；与模型对照组比较，HBOA-H组、HBOA-L组COL-I、COL-III、TIMP-1的蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01），MMP-9的蛋白表达则明显升高（P<0.01）。RT-PCR检测结果显示，与正常组比较，模型对照组大鼠肝组织中COL-I、COL-III、TNF-α、TGF-β1、ERK1、ERK2 mRNA表达明显升高，而PPARγ mRNA的表达则降低（P＜0.05或 P＜0.01）；与模型对照组比较，HBOA-H组肝组织COL-I、COL-III、TNF-α、TGF-β1、ERK1、ERK2 mRNA表达均有降低（P<0.01或P<0.05）；HBOA-L组肝组织COL-I、COL-III、TGF-β1、ERK1、ERK2 mRNA表达均有降低（P<0.01或P<0.05），TNF-αmRNA表达水平有所下降，但是未见有统计学意义，HBOA-H组和HBOA-L组肝组织PPARγmRNA表达则明显升高（P<0.05）。
　　结论:研究结果表明，HBOA可调控MMP-9、TIMP-1、PPARγ和ERK1/2等细胞因子和抑制细胞外基质的过度沉积,这些作用可能成为其逆转大鼠化学性肝纤维化的作用机制。

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前言

1.立题依据

2.选题意义和研究思路

第一部分 HBOA对CCl4诱导肝纤维化大鼠细胞外基质表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4讨论

第二部分 HBOA对CCl4诱导肝纤维化大鼠细胞因子TNF-α、TGF-β1、PPARγ及细胞外信号调节蛋白激酶表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4讨论

全文总结

参考文献

综述:肝纤维化相关信号转导通路与PPARγ的关系研究进展

致谢

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