CCR9/CCL25在NSCLC患者中的表达和促进NSCLC细胞侵袭、迁移作用的研究

摘要

目的：趋化因子是一类分子量为8-14kDa的小蛋白，与其相应的受体结合后具有控制细胞定向迁移，与多种实体瘤发生、发展密切相关，被认为是恶性肿瘤免疫治疗新的潜在分子靶点。其中CCR9及其唯一天然受体CCL25，在多种实体瘤的研究中逐渐被发现。目前在多种恶性肿瘤组织中发现CCR9高表达，如鼻咽癌、黑色素瘤、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌等。此外，在CCR9在肺腺癌组织表达明显增加，且与阳性淋巴结转移有关。
　　然而，受限于组织标本采集，CCR9/CCL25高表达并不能应用于对NSCLC患者术前淋巴结转移、P-TNM分期等评估，且CCR9/CCL25生物轴促进癌症转移的的分子机制尚未阐明，极大限制其在临床中的应用。本实验旨在研究CCL25及其下游因子AKT、VEGF-D和MMP-9蛋白在NSCLC患者术前血清中的表达及其与临床病理因素之间的关系;研究CCR9/CCL25生物轴对NSCLC细胞迁移和侵袭的影响，以及与MMP-2/9的表达和PI3K/Akt通路之间的关系。
　　方法：1.选取2014-09至2015-04在广西壮族自治区人民医院行非小细胞肺癌切除+淋巴结清扫术的60例患者作为观察组，选取同期60例健康自愿者作为正常对照组，采用酶联免疫荧光(ELISA)法检测血清CCL25、AKT、VEGF-D和MMP-9的表达水平，结合患者的临床病理资料，进行统计分析。
　　2.采用Transwell小室迁移侵袭实验观察CCR9/CCL25生物轴对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响。采用半定量RT-PCR法检测CCR9、MMP-2和MMP-9mRNA的表达;采用western blot检测p-PI3Kp85、p-Akt、MMP-2以及MMP-9蛋白的表达。
　　结果：1.(1)NSCLC患者手术前血清中CCL25、AKT、VEGF-D和MMP-9的表达水平均显著高于健康志愿者（均P＜0.001）;(2)CCL25、AKT、VEGF-D和MMP-9的表达水平与肺癌原发肿瘤大小、淋巴结转移、病理类型和TNM分期等存在相关性(P＜0.05)，与患者性别、年龄等因素无明显相关(P＞0.05)。(3)ROC曲线分析显示NSCLC患者有淋巴结转移的临界值为CCL25=334ng/L,AKT=345ng/L,VEGF-D=362ng/L,MMP-9=374μg/L;CCL25的敏感度为74.2％，特异度为86.2％;AKT的敏感度为71.0％，特异度为96.6％;VEGF-D的敏感度为90.3％，特异度为96.6％;MMP-9诊断NSCLC的敏感度为71.0％，特异度为89.6％。(4)NSCLC患者术前血清CCL25和AKT水平呈显著正相关(r=0.863，P＜0.001);CCL25和VEGF-D水平呈正相关(r=0.785，P＜0.001)，CCL25和MMP-9水平显著呈正相关(r=0.881，P＜0.001)。
　　2.发现CCR9mRNA在非小细胞肺癌细胞中广泛表达，CCL25显著促进NSCLC细胞迁移和侵袭(p＜0.001)，伴随着MMP-2和MMP-9蛋白和mRNA表达增加，而Anti-CCR9(100ng/ml)完全抑制CCL25诱导细胞迁移和侵袭和促进MMP-2、MMP-9表达增加与其相应的对照组相比(p＜0.001)。同样，CCL25诱导PI3K/AKT激活，但这种效应被wortmannin抑制(10nM，PI3K抑制剂)。此外，wortmannin也可以抑制NSCLC细胞迁移和侵袭和MMP-2MMP-9的。
　　结论：1.临床研究表明：NSCLC患者血清CCL25、AKT、VEGF-D和MMP-9表达水平显著高于健康对照组表达水平，且与肺癌的肿瘤大小、病例类型、淋巴结转移、临床分期有密切联系，可应用于NSCLC患者的术前早期诊断、发生淋巴结转移风险评估等;此外，研究数据表明血清CCL25与MMP-9、VEGF-D和AKT均高度相关，提示PI3K/AKT通路激活及其下游的效应细胞因子（VEGF-D和MMP-9）的表达有可能受CCR9/CCL25生物轴调节。
　　2.基础实验研究表明：CCR9-CCL25生物轴轴促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。此外，研究还表明CCR9-CCL25生物轴诱导细胞迁移和侵袭通过PI3K/AKT通路的激活。因此，CCR9-CCCL25生物轴可能是一个潜在的新型基因靶向治疗非小细胞肺癌。

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摘要

前言

第一部分 CCL25、AKT、VEGF-D和MMP-9蛋白在非小细胞肺癌患者中表达及其临床意义

资料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 CCR9／CCL25生物轴通过PI3K／AKT通路调节MMP的表达促进NSCLC细胞的迁移和侵袭

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

综述 趋化因子受体CCR9及其配体CCL25在恶性肿瘤中的作用及其作用机制研究进展

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