NMDA受体在两种细胞表达体系中的建立比较及MCP-1对NMDA受体介导电流的影响

摘要

目的:在爪蟾卵母细胞和HEK-293细胞这两种表达体系上建立特异性表达NR2AR、NR2BR这2种主要NMDA受体亚型的细胞模型，并对表达在爪蟾卵母细胞上的NR2AR、NR2BR介导的电流和大鼠海马脑片CA1区NMDA受体介导的EPSCNR2AR、EPSCNR2BR电流进行研究，探讨艾滋性认知功能障碍（HAND）致病因素MCP-1对上述电流的影响，为进一步深入研究NMDA受体不同亚型受体在MCP-1导致HAND发病过程中的作用及机制奠定基础。
　　方法:分别用显微注射法和脂质体转染法将NMDA受体表达在爪蟾卵母细胞和培养的HEK-293细胞上，并利用全细胞膜片钳技术，分别在表达受体成功的细胞体系和大鼠海马脑片上记录NMDA受体亚型NR2AR、NR2BR介导的电流，观察MCP-1对上述电流的影响。
　　结果:(1)在建立的爪蟾卵母表达系统中，NMDA受体基因注射成功率为100％,能以全细胞膜片钳技术检测到所表达NMDA受体亚型NR2AR和NR2BR介导的电流，且MCP-1能显著增加NR2AR介导的电流幅度(P＜0.05，n=8)，MCP-1也能显著增加NR2BR介导电流的幅度(P＜0.05，n=9)，但有2例显示MCP-1显著降低NR2BR介导的电流(P＜0.05，n=2);在脂质体转染NMDA受体基因的HEK-293细胞上，转染成功率只有6.7±1.39％，未成功检测到所表达NR2AR和NR2BR介导的全细胞电流;(2)MCP-1能显著增强大鼠海马脑片CA1区NR2AR介导的兴奋性突触后电流(EPSCNR2AR)(P＜0.05，n=10)，冲洗掉MCP-1后，上述电流可恢复接近到给药前的基础值，且此电流可被NR2AR拮抗剂D-CPP所阻断，说明此电流为NR2A受体所介导;(3)MCP-1能显著增强大鼠海马脑片CA1区NR2BR介导的兴奋性突触后电流(EP SCNR2BR)的幅度(P＜0.05，n=12)，冲洗掉MCP-1后，上述电流可恢复到接近给药前的基础值，且此电流可被NR2BR拮抗剂ifenprodil所阻断，说明此电流为NR2B受体所介导。
　　结论:(1)成功建立了爪蟾卵母细胞对NR2AR及NR2BR的表达体系，且主要数据显示，在排除哺乳动物系统中出现的间接影响条件下，MCP-1有显著激活主要NMDAR亚型NR2AR和NR2BR的功能;2例MCP-1显著降低NR2BR介导电流的情况显示，MCP-1对NR2BR介导电流可能产生双向性影响，易化或抑制与细胞状态变化有关，具体机制有待进一步研究;(2)在爪蟾卵母细胞和来源于人的HEK-293这2种表达异源性受体的细胞体系中，爪蟾卵母细胞表达NR2AR和NR2BR的成功率远高于HEK-293细胞;(3)MCP-1对大鼠海马脑片CA1区NMDA受体介导的EPSCNR2AR、EPSCNR2BR电流均具有明显的易化作用，与结论(1)MCP-1对爪蟾卵母细胞上表达NR2AR、NR2BR介导电流的主要数据显示影响一致，说明无论在哺乳动物体系或非哺乳动物的细胞体系中，MCP-1都能显著增强NR2AR、NR2BR的功能。MCP-1对NR2AR的作用主要与神经系统功能的生理性调节有关，MCP-1对NR2BR的作用主要与神经损伤有关。

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中英文缩略词表

摘要

前言

第一章 NMDA受体在两种表达体系中的建立与比较

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二节 NMDA受体在HEK-293细胞的表达、检测及其在两种表达体系中的比较

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二章 MCP-1对爪蟾卵母细胞表达的NMDA受体通道电流的影响

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三章 MCP-1对大鼠海马脑片CA1区NMDA受体介导的兴奋性突触后电流的影响

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

全文总结

参考文献

综述 NMDA受体及其亚型NR2B在艾滋性认知功能障碍中的研究进展

致谢