水杨酸钠的SGN毒性研究：NMDA受体活动对GABAa受体电流的影响

摘要

目的:观察在水杨酸钠(sodium salicylate，SS)作用下，大鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)上NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)活动对GABAa受体(γ-aminobutyric acid a receptor,GABAaR)电流的影响，进一步完善水杨酸钠耳毒性的受体机制。 方法:急性分离培养新生SD大鼠SGN，采用全细胞膜片钳记录模式，观察在不同浓度水杨酸钠作用下，分别激活或抑制NMDAR对GABAaR电流的影响。 结果:(1)SGN形态特点:SGN呈圆形或椭圆形，个体较大，表面光滑、胞膜完整、折光性强，细胞周围光晕明显，胞质均匀，核仁较大。6小时后逐渐贴壁，7小时左右贴壁完成，24小时后，SGN胞体长出神经突起，其长度达胞体的三倍以上，并可交织成网，7天以后，SGN开始萎缩、凋亡，细胞裂解并释放出胞质;(2)SGN鉴定:若急性分离培养的细胞可记录到一个快速激活、快速失活的内向电流，该电流可被0.3μM TTX迅速阻断，经洗脱后该内向电流可基本恢复，证实该电流为TTX敏感性电压门控性钠离子通道电流，该细胞为SGN;(3)生理状态及0.5mM SS和5mM SS分别作用下，0.5mM（以下相同）NMDA均未引出明显的NMDAR电流;(4)0.5mM SS和5mM SS分别作用下，0.SmM（以下相同）GABA引出的电流密度均值分别减少28.47％(n=5，F=67.020，P=0.000＜0.05)、55.77％(n=6,F=67.020,P=0.000＜0.05);(5)NMDA+GABA、0.2mM（以下相同）APV+GABA与GABA比较，引出的电流密度均值分别减小11.12％(n=5，F=1.626，P=0.098＞0.05)、6.64％(n=5，F=1.626,P=0.306＞0.05);(6)0.5mM SS+GABA+NMDA与0.5mMSS+GABA比较，电流密度均值减小27.72％(n=5，F=11.779，P=0.021＜0.05)，0.5mM SS+GABA+APV与0.5mM SS+GABA比较，电流密度均值增加22.30％(n=5,F=11.779,P=0.048＜0.05);(7)5mM SS+GABA+NMDA与5mM SS+GABA比较，电流密度均值减小23.09％(n=8，F=162.313，P=0.007＜0.05)，5mM SS+GABA+APV与5mM SS+GABA比较，电流密度均值增加115.08％(n=5，F=162.313，P=0.000＜0.05)。 结论:(1)水杨酸钠可逆性抑制GABAaR的电流，且呈浓度依赖性; (2)生理状态下，NMDAR对GABAaR电流无显著影响，即不含水杨酸钠时，NMDAR可轻度抑制GABAaR电流，但差异无统计学意义; (3)水杨酸钠浓度依赖性地介导NMDAR抑制GABAaR电流，即越高浓度的水杨酸钠作用下，NMDAR对GABAaR电流的抑制作用越强。