广西巴马小型猪卵泡抑素（Follistatin）的cDNA克隆、序列分析及原核表达

摘要

本研究根据GeneBank(NCBI)中的FS基因编码区序列，设计并合成了一对特异性引物。上游引物：5'-ATGGTCCGTCCCAAGC-3'，对应于FS基因编码区第1-16位核苷酸；下游引物:5'-TTACCACTCTAGAATAGAAGATATAGG-3'，对应于FS基因编码区第1008-1035位核苷酸。以巴马小型猪的卵巢组织总RNA为模板，利用M-MLV反转录酶，通过反向聚合酶链式反应从猪卵巢的mRNA中扩增出相应的cDNA片段。该扩增片段经纯化后，连接到pMD18-T载体上扩增测序。 使用添加酶切位点的引物，经PCR扩增获得FS基因，用BamH I和Sal I双酶切后，定向插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中，构建pET-Fo原核表达质粒，转化大肠杆菌BL21。重组质粒pET-Fo经过鉴定后，用I PTG诱导表达，经SDS-PAGE和Western Blotting分析，证明已成功地表达了FS的融合蛋白(约58KD)，此融合蛋白以包涵体的形式表达，约占菌体蛋白总量的1 2﹪。通过对FS融合蛋白的诱导表达的研究，获得其最佳诱导表达的温度、IPTG浓度、诱导时间分别为：37℃，1.0-1.5mM IPTG，诱导4-8h。

目录

文摘

英文文摘

常用缩写词

第一章文献综述

一、Follistatin(FS)及其基因结构特征

二、Follistatin的生物学作用及机制

三、Follistatin分泌的调节

四、本研究目的和意义

第二章试验研究

一、材料

二、主要仪器

三、溶液与培养基的配制

四、试验一：广西巴马小型猪卵泡抑素的克隆、序列分析

五、试验二：广西巴马小型猪卵泡抑素（FS）融合蛋白表达

1实验方法

2结果与分析

3讨论

六、结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况