海南热带雨林苏云金芽孢杆菌的分离及其两分离菌株的生物学特性鉴定

摘要

本研究从海南省尖峰岭热带原始雨林区、霸王岭热带原始雨林区共采集土样532份，利用醋酸钠一抗生素选择性培养基，分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株35株，出菌率为6.58％，分离率为3.86％。伴孢晶体类型为菱形、圆形、方形等。 对分离株W015-1、S1478-1菌株做生物学特性鉴定，结果表明：两菌株菌体均为短杆状，有芽孢和菱形晶体产生。PCR扩增菌株W015-1、S1478-1的16srDNA序列，与GenBank中的己登入的菌株的16S rDNA进行比较，发现与GenBank中已登录的苏云金芽孢杆菌的同源性W015-1为97％，S1478-1为99％。以苏云金芽孢杆菌标准菌株HD-73为对照，对菌株W015-1、S1478-1的杀虫晶体蛋白进行SDS-PAGE电泳分析，结果显示W015-1、S1478-1的蛋白电泳图谱与HD-73相同，都只表达约130KDa的晶体蛋白，伴孢晶体为菱形。PCR-RFLP技术对菌株W015-1、S1478-1基因型进行鉴定，结果表明：W015-1、S1478-1含有编码ICPs的crylAc基因。 将分离菌株S1478-1对鳞翅目昆虫小菜蛾进行生物活性测定，生物测定结果表明，菌株对小菜蛾具有高毒力，校正死亡率为100％．半致死浓度为6.0×108芽孢/ml。

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第一章文献综述

1.1苏云金芽孢杆菌的形态特征及其分类鉴定

1.2苏云金芽孢杆菌的研究历史

1.3苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其基因

1.4苏云金芽孢杆菌的分离

1.5苏云金芽孢杆菌ICP基因鉴定的策略与进展

1.6苏云金芽孢杆菌在动植物病虫害防治中的应用进展

1.7本研究的目的和意义

第二章热带雨林区苏云金芽孢杆菌的分离

2.1土壤样本的取样方法

2.2苏云金芽孢杆菌的分离一醋酸钠抗生素选择性培养基筛选

2.3苏云金芽孢杆菌的初步鉴定

2.4实验试剂及仪器

2.5结果和分析

2.6讨论

第三章分离株W015-1，S1478-1生物学特性的研究

3.1材料和方法

3.1.1材料

3.1.2研究方法

3.2结果和分析

3.2.1分离株W015-1、S1478-1菌株的形态和晶体观察

3.2.2分离株W015-1、s1478-1菌株生长曲线的测定结果

3.2.3分离株W015-1、S1478-1菌株的16SrDNA序列分析

3.2.4分离株W015-1、S1478-1杀虫晶体蛋白的SDS-PAGE分析

3.2.5分离株W015-1、S1478-1杀虫晶体蛋白的基因型鉴定

3.2.6分离株S1478-1对小菜蛾的杀虫活性测定

3.3讨论

第三章结论

参考文献

附录缩写词英汉对照

致谢

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