厚荚相思树种根瘤菌的多样性研究

摘要

从厚荚相思(Acacia crassicarpa)树种上分离、纯化获得45个菌株，其中组培苗、实生苗、扦插苗的厚荚相思根瘤菌各15株。对该45株根瘤菌进行了苗木回接、生理生化特性、生长适应性实验，并进行了16S r DNAPCR-RFLP分析以及16S r DNA全序列分析，对所获菌株进行了初步的归类及多样性分析。
　　 全部菌株接种到厚荚相思苗木上都能结瘤，平均结瘤数为9.6个。单株结瘤数最高的为Qx6-8，结瘤数为结瘤率为100％。最差的是ZX3-2，单株结瘤数2.5个，结瘤率为50％。
　　 供试的45株菌株均不能把乳糖还原为3．酮基乳糖，59％的菌株能利用柠檬酸盐，36％的菌株能水解利用淀粉，91％的菌株能液化明胶。在石蕊牛奶的反应中，有36％的菌株产酸，64％的菌株产碱。11％的菌株能利用铵盐，84％的菌株能利用硝酸盐。所有菌株都能较好地利用供试的8种碳源。
　　 供试菌株的最适生长温度为30℃，不耐高温与低温，只有QX6-8能在9℃下生长良好。最适生长环境为近中性，具有较强的耐碱性，耐酸能力较差。Qx6-8、Qx8-3能耐受2．O％的NaC1浓度。对抗生素敏感性差异较大，大部分菌株对Amp、Tc、Cm、Spc、Gm有较强的抗性作用，而对Km无抗性。QX6-8具备多种优良抗性。
　　 对45株菌株进行了16S rDNA PCR-RFLP分析，根据其16S rDNA的酶切图谱类型供试菌株初步分成11类。说明厚荚相思根瘤菌存在丰富的多样性。
　　 对39株菌株进行16S rDNA全序列分析，初步确定39株供试菌株可分为5类。ZZ2-2、ZZl-5、SZ5-4、Q9-8为芽孢杆菌属(Bacillus)。SX5-4、QZ2-2为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)。QS5-4为寡养单孢菌属（Stenotrophomonas）。QX6-8为伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)。ZS3-4、ZS2-2、ZS4-3等31个菌株属于慢生根瘤菌属Bradyrhizobium）。
　　 扦插苗根瘤菌的抗逆性要比组培苗和实生苗根瘤菌的抗逆性强，但是根瘤菌的分类跟苗木发育类型并无特定联系。