SaPIN2a沉默转基因龙葵大孢子发生雌配子体形成及珠心PCD的研究

摘要

本文利用石蜡切片和树脂包埋半薄切片显微观察及激光共聚焦扫描显微观察的手段研究了SaPIN2a沉默的转基因龙葵大孢子发生及雌配子体的形成。研究表明，在胚囊发育过程中，胚囊周围的珠心细胞发生细胞程序性死亡而退化，并且这种退化和珠心细胞距离胚囊的远近有关；接近胚囊的珠心细胞衰退明显，细胞质稀薄，自溶过程中有新液泡形成，细胞核变得不清晰，固缩成一些染色质团块，在细胞质中的囊泡状结构和液泡中充满细胞组分的碎片。紧靠胚囊的珠心细胞细胞质膜和液泡膜溶解，原生质体收缩变成暗黑色无结构物质，细胞死亡。TUNEL分析显示开花后两天的胚珠珠心细胞和维管束阳性反应，有DNA片段被原位标记，显示细胞凋亡特征。

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英文文摘

论文说明：缩略词表

1前言

1.1高等植物有性生殖过程概述

1.2植物有性生殖过程中的细胞程序死亡现象

1.3植物PCD的形态学及生化特征

1.4植物PCD的相关基因及其调控信号

1.5植物PCD的研究方法

1.6植物PCD相关蛋白酶及蛋白酶抑制剂的研究进展

1.7蛋白酶抑制剂

1.8 RNA干涉在基因功能研究中的应用

1.9本研究的目的及意义

2材料与方法

2.1试验材料及试剂

2.2实验方法

3结果

3.1 SaPIN2a沉默转基因龙葵植株分子鉴定

3.2 SaPIN2a沉默转基因龙葵发育过程石蜡组织切片观察

3.3 SaPIN2a沉默转基因龙葵发育激光共聚焦扫描显微镜观察

3.4 SaPIN2a沉默转基因龙葵发育树脂包埋半薄切片观察

3.5透射电镜超微结构观察

3.6细胞程序化死亡的TUNEL检测

3.7转基因沉默龙葵花中SaPIN2a免疫组化检测

4讨论

4.1SaPIN2a沉默转基因龙葵大孢子发生及雌配子体发育

4.2龙葵胚胎发育

4.3龙葵胚囊发育过程中珠心细胞的程序性死亡

参考文献

致谢

论文原创性声明