Prohibitin对雌激素受体阳性乳腺癌中雄激素受体表达调控的研究

摘要

乳腺癌是我国女性最常见肿瘤，ER阳性乳腺癌内分泌治疗抵抗是严峻的临床课题。Prohibitin(PHB)是一种在正常和癌细胞中具有多种功能的进化保守蛋白，PHB在癌细胞中的作用尚有争议。AR在乳腺癌中高表达，且在ER阳性和ER阴性乳腺癌中所起作用不同。在前列腺癌细胞中，PHB显示出抑制AR活性。在ER阳性乳腺癌细胞中，PHB能否调节AR的表达我们还无从知晓，目前国内外未见相关文献报道。
　　目的：明确PHB表达在乳腺癌生存预后中的作用，进一步明确PHB对ER阳性乳腺癌中AR表达的调控。
　　方法：我们首先用免疫组化法检测121例乳腺癌患者肿瘤组织和相应的癌旁正常乳腺组织中PHB和AR的蛋白表达，分析它们的表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性以及二者之间的相关性。为研究PHB和AR在ER阳性乳腺癌患者临床结局中的作用，我们用Kaplan-Meier plotter在线乳腺癌生存分析数据库，进行了荟萃分析。
　　随后的体外试验中，我们用PHB质粒转染ER阳性乳腺癌细胞株MCF-7和T47D，检测转染后PHB mRNA和PHB蛋白的表达，以验证PHB质粒是否成功转染。MTT法检测转染PHB质粒后细胞株的增殖情况，流式细胞术检测转染后ER阳性乳腺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化。实时定量PCR和免疫印迹法分别检测转染后AR mRNA和AR蛋白的表达。最后用免疫荧光染色法(IF)验证PHB和AR的蛋白表达，并显示其亚细胞定位。
　　结果：PHB和AR在人乳腺癌组织中低表达，PHB表达与淋巴结转移(P=0.034)、ER(P＜0.001)、PR(P＜0.001)和HER-2的表达(P=0.009)相关。AR表达与患者年龄(P=0.014)、ER(P=0.016)和E-钙粘蛋白表达(P=0.043)相关。Spearman等级相关性分析表明，PHB和AR表达呈显著正相关(r=0.521，P＜0.001)。低表达PHB和AR与ER阳性乳腺癌患者更短的OS、DMFS正相关。PHB质粒瞬时转染MCF-7和T47D细胞株后，在mRNA和蛋白水平均检测到PHB表达显著升高，提示转染成功。PHB过表达质粒转染的细胞株中，细胞增殖速度明显减慢，细胞周期阻滞于S/G2期，细胞凋亡增多。转染组细胞株中，AR mRNA和AR蛋白表达均显著增加，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。IF显示AR主要定位于细胞核，转染后AR蛋白在核水平的表达显著增加(P＜0.05)。
　　结论：PHB在乳腺癌组织中低表达，PHB低表达与乳腺癌患者的不良预后正相关。PHB过表达可抑制ER阳性乳腺癌细胞的增殖，改变细胞周期分布，促进细胞凋亡，显著增加AR在mRNA和蛋白水平的表达。在乳腺癌组织中，PHB和AR表达呈显著正相关。
　　结果表明，PHB可以促进ER阳性乳腺癌中AR的活化，PHB和AR有望成为ER阳性乳腺癌治疗的潜在分子靶点。

目录

摘要

第一章 前言

1．1 乳腺癌的分子分型和内分泌治疗现状

1．2 雄激素受体(AR)与乳腺癌

1．3 Prohibitin与乳腺癌

1．4 选题意义

第二章 Prohibitin在乳腺癌中的表达和临床预后关系分析

2．1 材料和方法

2．2 实验结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 Prohibitin对ER阳性乳腺癌细胞中AR表达的调控

3．1 材料和方法

3．2 实验结果

3．3 讨论

3．4 小结

第四章 全文总结

参考文献

英文缩略语表

攻读博士期间成果

致谢

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