刺蒺藜对SK-MeL-23细胞黑素代谢调控的研究

摘要

目的：
　　研究刺蒺藜不同浓度对人黑色素瘤SK-Mel-23细胞黑素代谢的影响，并探讨刺蒺藜调节色素代谢的分子机制。
　　方法：
　　以刺蒺藜水提取物为实验药物，人黑色素瘤SK-Mel-23细胞为模型，实验分为刺蒺藜组、H-89+刺蒺藜组、空白对照组，MTT法检测SK-Mel-23细胞活性，NaOH裂解法测定黑素含量，多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性，Western Blot法检测蛋白表达。
　　结果：
　　1.刺蒺藜组对黑素代谢的影响和作用机制
　　1.1 对细胞活性的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后，均对细胞活性有统计学意义（F=19.623，P＜0.001;F=5.49，P＜0.01;F=2.04，P＜0.01），在低浓度的时促进细胞活性，随着浓度增加呈抑制作用。
　　1.2 对黑素合成的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后，均对黑素合成有统计学意义（F=11.927，P＜0.001;F=9.03，P＜0.001;F=16.5，P＜0.001），在低浓度时对黑素合成呈抑制作用，随着浓度增加呈促进作用。
　　1.3 对酪氨酸酶活性的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后，对酪氨酸酶活性有统计学意义(F=5.74，P＜0.001;F=3.97，P＜0.001;F=21.55，P＜0.001)，低浓度的时对SK-Mel-23细胞酪氨酸酶活性呈抑制作用，随着浓度增加呈促进作用。
　　1.4 对蛋白表达的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞48h后，与对照组比对TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的影响有统计学意义(F=23.97,P＜0.001;F=11.37,P＜0.001;F=1.53,P＜0.05;F=2.67,P＜0.05)，低浓度的时候抑制蛋白表达，随着浓度增加促进蛋白表达。
　　2.H-89+刺蒺藜组对黑素代谢及蛋白表达的影响
　　2.1 对黑素合成的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h，不同浓度组与加入H-89对照组比对黑素合成的影响无统计学意义（F=0.683，P=0.61），不同浓度组与不加入H-89对照组比对黑素合成的影响有统计学意义(F=2915，P＜0.001)。
　　2.2 对酪氨酸酶活性的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h，不同浓度组与加入H-89对照组比对酪氨酸酶活性的影响无统计学意义(F=0.416，P=0.822)，不同浓度组与不加入H-89对照组比对酪氨酸酶活性的影响有统计学意义(F=354.9，P＜0.001)。
　　2.3 对蛋白表达的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h，各浓度组与加H-89对照组对比对TYR、TRP-1、MITF、p-CREB表达无统计学意义(F=2.499，P=0.9;F=3.062，P=0.89;F=0.76,P=0.61;F=0.89，=0.51)，蛋白的表达不随浓度的改变而变化，各浓度组与不加H-89对照组对比对蛋白表达有统计学意义(F=7.324,P＜0.05;F=2.927.P＜0.05;F=10.41,P＜0.01;F=7.233,P＜0.001)。
　　讨论：
　　本实验证实刺蒺藜能双向调节色素代谢，实验最佳时间为48h。刺蒺藜在低浓度时对细胞活性有抑制作用，在高浓度时对细胞活性有促进作用;对黑素合成和酪氨酸酶活性呈相反作用，其作用机制可能是在低浓度时抑制TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的表达，而在高浓度时促进蛋白的表达。加入PKA通路抑制剂后刺蒺藜不同浓度对色素代谢基本无改变，说明刺蒺藜是通过调控cAMP/PKA通路来调控色素代谢的。

目录

摘要

1 研究背景和意义

2 黑素合成相关蛋白和通路

3 有祛风功效的中药在色素代谢方面的研究

4．α-MSH／cAMP／PKA通路在色素代谢中的研究

5．本课题研究的内容和科学意义

第二章 刺蒺藜不同浓度组在不同时间阶段对黑素代谢的影响

引言

1 材料与方法

2．结果

3．讨论

引言

1 材料与方法

2 结果

3．讨论

1．实验结论

2．本实验的创新点

3．本实验的不足与后续工作

参考文献

附录：综述

硕士在读期间发表的论文

中英文缩写对照表

致谢

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