miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

摘要

microRNAs（miRNAs）是一类长约21~25 nt的非编码小分子RNA，已有大量研究表明 miRNAs参与调控脂肪形成。但 miR-23b-3p在脂肪形成中的作用未见报道。本研究选用3T3-L1前脂肪细胞作为研究对象，探讨miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的影响。通过化学合成的miR-23b-3p模拟物 mimic和抑制物inhibitor成功转入3T3-L1前脂肪细胞后，利用CCK-8法和流式细胞术检测miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响；并通过实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞周期基因CyclinD1和CDK4以及成脂标志基因PPARγ和FABP4的表达情况；油红O染色测定甘油三酯积累情况。得到如下结果：
　　1．过表达miR-23b-3p抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，导致细胞G1期阻滞，CyclinD1和CDK4在mRNA和蛋白水平极显著下调；抑制miR-23b-3p的表达能够促进3T3-L1前脂肪细胞增殖，G1期细胞比例减少，CyclinD1和CDK4在mRNA和蛋白水平显著或极显著上调。
　　2．在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中，miR-23b-3p的表达水平上调。
　　3．过表达miR-23b-3p，甘油三酯积累增加，PPARγ和FABP4在mRNA和蛋白水平显著或极显著上调；抑制miR-23b-3p表达，甘油三酯积累减少，PPARγ和FABP4在mRNA和蛋白水平极显著下调。
　　结论：miR-23b-3p能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖并促进其分化为成熟脂肪细胞。

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1 前言

1.1 microRNAs

1.1.1 microRNAs的发现

1.1.2 microRNAs的特征

1.1.3 microRNAs的生物合成过程及作用机制

1.2 细胞周期

1.2.1 细胞增殖

1.2.2 细胞周期的调控

1.3脂肪形成概述

1.3.1 脂肪组织的形成和功能

1.3.2 脂肪细胞分化过程

1.3.3 脂肪细胞分化的分子调控

1.4 microRNAs与脂肪形成

1.4.1 microRNAs参与调节脂肪细胞增殖

1.4.2 microRNAs促进脂肪细胞分化

1.4.3 microRNAs抑制脂肪细胞分化

1.5 研究目的与意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 细胞系

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.1.4 主要试剂配方

2.2 方法

2.2.1 成脂诱导分化

2.2.2 miR-23b-3p寡核苷酸转染

2.2.3 细胞总RNA的提取及qPCR

2.2.4细胞活力测定

2.2.5细胞周期检测

2.2.6 细胞总蛋白的提取及浓度测定

2.2.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜及显影

2.2.8 统计学分析

3 结果与分析

3.1 miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响

3.1.1 过表达miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响

3.1.2 miR-23b-3p过表达导致3T3-L1前脂肪细胞G1期阻滞

3.1.3 抑制miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响

3.1.4 抑制miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞周期的影响

3.2 过表达miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响

3.2.1 miR-23b-3p在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中表达上调

3.2.2 过表达miR-23b-3p促进3T3-L1前脂肪细胞分化

3.2.3 抑制miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献