基于冻干前处理结合LC-MS/MS分析鸡肉中兽药多残留研究

摘要

传统的样品前处理技术通常由于过度均质，多步萃取，过度浓缩和使用大量有机试剂而容易导致结果的偏差大和环境污染。本研究利用冻干原理结合高选择性和高灵敏度的液相色谱-串联质谱，简单的涡旋萃取可望代替药物残留传统前处理方法。为了评估和验证这种新的样品前处理方法，以氟喹诺酮类，磺胺类和大环内酯类三类抗菌药物为例，首先建立了基于冻干法（传统前处理法作为对照）结合LC-MS/MS方法分析通过拌饲给药获得的阳性鸡肉样品中7种抗菌药残留。然后用SPSS19.0统计软件对不同批次、不同浓度的阳性鸡以及不同仪器检测冻干法提取阳性鸡肉中的药物含量进行分析比较。旨在为兽药残留分析检测开拓新思路，为其他兽药残留分析检测采用新的有效前处理方法提供新手段、新理论和技术支持。
　　鸡肉样品冷冻干燥，复水，1%乙酸乙腈4mL提取，离心，上清液用20%甲醇水含0.1%甲酸定容到8mL。液相色谱-串联质谱分析检测，氘代物恩诺沙星、环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶作为内标物。乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相，目标药物经Zorbax SB-Aq色谱柱（150mm×2.1mm i.d.,3.5μm）分离，梯度洗脱，采用电喷雾离子源，正离子扫描，三重四极杆质谱仪进行多反应监测分析，基质匹配外标法和内标法定量。7种目标分析物在实验浓度范围内线性良好，相关系数（r2）均大于0.99；检测限和定量限分别在0.2～1.5μg kg-1和0.5～4.0μg kg-1范围内。在50，100及200μg kg-1（沙拉沙星添加水平为10，20和40μg kg-1）三个浓度添加水平，以外标法定量7种药物的平均回收率在61.0%～93.9%之间，变异系数在1.1%～14.1%之间；以内标法定量5种药物的平均回收率在86.2%～119.6%之间，变异系数在1.1%～15.0%之间。
　　统计分析结果表明：冻干法提取不同批次、不同浓度的阳性鸡肉中的平均药物含量与传统法提取的相比较，除4和6号鸡的氟喹诺酮类药物、5号鸡的磺胺间甲氧嘧啶和泰乐菌素冻干法提取的平均值显著低于（P值＜0.05）传统法的外，其余药物无显著差异（P值＞0.05）；比较三台不同的液相色谱-串联质谱仪检测冻干法提取的阳性鸡肉中的平均药物含量，所有的药物无显著差异（P值＞0.05）。这说明冻干法无论是不同浓度水平的鸡还是不同的分析仪器，该方法的准确度和精密度与传统提取方法均具有可比性。但是冻干法可以有效的减少共萃取物，降低基质效应。冻干法简单、重复性好和经济环保，可以作为传统法的替代方法来检测鸡肉样品中的抗菌药残留。

目录

声明

英文缩略词表

1前言

1. 1兽药残留现状及其危害

1. 2兽药残留分析检测方法

1. 3本课题研究目的及意义

2. 1 材料

2. 2 前处理方法

2. 3LC-MS/MS分析条件

2. 4 测定结果计算公式

2. 5 方法学验证

2. 6 基质效应

2. 7 统计学分析

2. 8测定实际生物样品

3结果与讨论

3. 1 仪器条件优化

3. 2样品前处理方法优化

3. 3 方法学验证

3. 4基质效应

3. 5统计学分析

3. 6测定实际生物样品

4全文总结

致谢

参考文献

附录硕士期间发表论文情况