高效液相色谱法测定发酵液中康百汀含量

摘要

普伐他汀(Pravastatin)是一种新型降血脂药，属国家二类新药，其发酵生产是通过稀有马杜拉放线菌(Actinomadura)将康百汀(Compactin)生物转化而成。康百汀发酵液中康百汀以康百汀酸和康百汀内酯两种形式存在，准确快速的检测分析方法直接影响到普伐他汀的质量及生产成本。缩短发酵液中康百汀含量测定时间，减少环境污染是本论文的目的所在。　　论文根据康百汀发酵生产特性，摸索出康百汀发酵液提取溶剂及提取时间等条件特征，设计并采用高效液相色谱法对康百汀发酵液进行分析测定试验，初步建立一种快速测定发酵液中康百汀含量的方法，实现了实验室研究与发酵工程技术的有机结合。　　论文研究结果表明，当采用高效液相色谱法HysperilODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相为乙腈：0.03mol·L。磷酸二氢钠缓冲液(1200：800，v/v,pH=4.0)，流速为1.0ml·min-1，检测波长为238nm,柱温25℃，进样量10μl时，康百汀发酵液生产中康百汀酸和康百汀内酯分别在9.75～487.68mg·L-1，10.20～509.79mg·L-1内呈良好线性关系，相关系数(r)分别为0.999942和0.999801，平均加样回收率分别为99.6％和99.3％，RSD分别为0.42％和0.29％。连续6个月的试验测定结果表明，本研究课题所得出的方法简单，准确可靠，重现性好，可用于发酵液中康百汀含量的测定。

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前言

第一章国内外测定发酵液中康百汀含量方法简介

1.1医药发酵工业的现状与发展趋势

1.1.1发酵工业与技术简介

1.1.2医药工业中的发酵生产现状与趋势

1.2原料药生产中发酵液检测技术进展

1.2.1发酵过程的基本任务

1.2.2发酵过程的检测目的

1.3康百汀原料药发酵生产特性

1.4康百汀酸和康百汀内酯的化学性质

1.5发酵液中康百汀含量测定分析方法

第二章高效液相色谱法测定发酵液中康百汀含量的方法研究

2.1色谱分析方法特点

2.2高效液相色谱法分类

2.3材料与仪器设备

2.3.1实验材料

2.3.2主要仪器设备

2.4高效液相色谱方法的建立

2.5样品溶液的预处理

2.6实验内容及方法

2.6.1测定波长的选择

2.6.2色谱方法的试验

2.6.3高效液相色谱法色谱参数简介

2.6.4 C18色谱柱分离条件试验

2.6.5不同厂家品牌的色谱柱测定效果试验

2.6.6流动相组分对测定效果影响试验

2.6.7系统适应性试验

2.6.8标准溶液的制备与标准曲线的绘制

2.6.9标准品溶液的稳定性试验

2.6.10精密度试验

2.6.11准确度试验

2.6.12最低检测限的测定

2.6.13供试品溶液(康百汀发酵液)制备方法优选

第三章发酵生产过程中分析方法的实际运用

3.1样品测定

3.1.1 1#菌种发酵液含量测定

3.1.2 2#菌种发酵液含量测定

3.2检验废弃物的危害防护及治理

3.2.1检验废弃物的性质及危害

3.2.2操作安全防护

3.2.3检验废弃物的治理

3.3结论

第四章分析与讨论

4.1讨论

4.1.1色谱柱的选择

4.1.2流动相的选择

4.1.3 pH值及磷酸二氢钠对测定效果影响

4.1.4供试品制备方法优选

4.1.5标准品溶液贮藏条件选择

4.1.6测定方法的可行性

总结与展望

参考文献

在学期间发表与学位论文内容相关的学术论文

致谢