溶藻弧菌脂多糖多态性分析及脂多糖刺激点带石斑鱼的免疫效果研究

摘要

本研究首先以热酚水抽提法提取溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力株HN08811、HN08155、HN08813、HN08335、HN07006以及非毒力株HN08805、HN08307、HN08156、HN08801、TG06003的粗脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS),分别取10μg进行SDS-PAGE电泳,结果表明,不同毒力溶藻弧菌脂多糖的电泳条带存在较丰富的多态性,在类脂质A区段(分离胶的上半部分),不同菌株间图谱呈片状堆积,多态性难以分辨;在抗原多糖O-特异性侧链区段(分离胶的下半部分)毒力菌株的条带清晰,非毒力菌株产生细而密集的可辨条带。
　　 选用标准大肠杆菌(E.coli055:B5)LPS刺激的石斑鱼头肾细胞cDNA为Tester组,注射磷酸缓冲液(PBS)的对照组石斑鱼头肾细胞cDNA为Driver组,进行抑制差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH),构建cDNA文库。对阳性克隆进行测序并经生物信息学分析,共获得15种不同功能基因的克隆。其免疫相关功能基因有热激蛋白因子71(Hsc71)和分泌型免疫球蛋白重链基因2种;氧运输功能基因有血红素-β链(beta-chain Hb);蛋白质合成有关的功能基因有蛋白质翻译延伸因子-2(Eef2)、真核生物翻译延伸因子1γ、40S核糖体蛋白S8、核糖体蛋白大亚基L37、核糖体大亚基L3、60S核糖体蛋白大亚基L26、核糖体蛋白大亚基L6和18S核糖体7种;代谢功能基因β肌动蛋白1种,其他功能基因有低绒毛膜酶前体基因、移位酶前体蛋白亚基SecY基因、草丁膦乙酰转移酶基因和G蛋白亚基基因4种。
　　 本研究首次研究了LPS对点带石斑鱼功能基因的诱导作用,成功获得的热激蛋白基因Hsc71和免疫球蛋白基因为阐明LPS的免疫保护作用提供了直接分子证据,具有重要的理论意义;本文的研究结构还表明多种核糖体合成功能基因和肌动蛋白基因的表达可能对提高石斑鱼的抗逆性具有重要作用。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略语

第一章 引言

第一节 脂多糖及其在水产养殖中的应用研究

1.1 LPS多态性研究

1.2 LPS对水产动物的免疫原性研究

1.3 LPS疫苗及其在水产养殖中的应用

1.4 展望

第二节 抑制差减杂交(SSH)技术及其在水产动物病害防治研究上的应用

2.1 SSH技术简介

2.2 SSH技术的原理

2.3 SSH技术的主要过程

2.4 SSH技术在水产动物病害防治研究上的应用

2.5 展望

第三节 弧菌的分型研究

3.1 RFLP技术在弧菌分型与鉴定中的应用

3.2 RAPD技术在弧菌分型与鉴定中的应用

3.3 AFLP技术在弧菌分型与鉴定中的应用

3.4 其它分子操作技术在弧菌分型与鉴定中的应用

3.5 展望

第四节 本研究的目的和意义

第二章 研究内容

第一节 不同毒力溶藻弧菌脂多糖多态性研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第二节 抑制差减杂交(SSH)文库的构建

1 材料与方法

2 结果与分析

4 讨论

小结

参考文献

作者在读期间论文发表情况

致谢