槐耳浸膏诱导人胃癌细胞系MKN28、SGC7901凋亡及抑制其MMPs表达的研究

摘要

目的：本实验通过中药制剂槐耳浸膏与不同分化水平胃癌细胞相互作用，检测槐耳浸膏在抑制其增殖、促进凋亡、抑制MMP-2、MMP-9表达水平中的作用，为槐耳浸膏在临床治疗胃癌提供切实的理论依据。
　　 方法：常规贴壁培养人胃高、中分化腺癌细胞系MKN28、SGC7901，倒置显微镜观察和MTT法检测浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏对MKN28和SGC7901细胞的增殖抑制作用；应用免疫荧光双染法(AO/EB)和流式细胞仪分别检测浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901细胞系48h后细胞凋亡情况；浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml槐耳浸膏作用于MKN28细胞48小时后，RT-PCR法分别检测MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平。
　　 结果：
　　 浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏作用MKN28和SGC7901细胞系于24h、48h、72h后，倒置显微镜下观察到各组均出现细胞体积缩小、膜破裂，核固缩碎裂等细胞凋亡的明显征象；
　　 MTT法示：1、与未加药组相比，浓度为0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28细胞系24h、48h、72h后，抑制率分别为5.73％、7.50％、20.50％；1mg/ml浓度的抑制率分别为11.70％、13.83％、15.59％；3mg/ml浓度的抑制率分别为16.06％、23.79％、24.73％；5mg/ml浓度的抑制率分别为24.91％、32.59％、34.67％；10mg/ml浓度的抑制率分别为30.98％、45.01％、46.15％。2、与未加药组相比，浓度为0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于SGC7901细胞系24h、48h、72h后，抑制率分别为2.43％、2.61％、5.60％；1mg/ml浓度的抑制率分别为5.63％、5.92％、13.70％；3mg/ml浓度的抑制率为12.48％、19.83％、22.02％；5mg/ml浓度的抑制率为23.10％、30.37％、33.93％；10mg/ml浓度的抑制率29.68％、35.28％、37.03％。P<0.05，以上数据有统计学差异；
　　 免疫荧光AO/EB双染法检测浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901细胞系48h后，其凋亡程度与药物浓度均呈剂量依赖性；
　　 流式细胞仪结果示浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28、SGC7901细胞系48h后，MKN28的凋亡率分别为41.76％、95.62％、94.13％；SGC7901的凋亡率分别为33.77％、83.74％、92.77％；
　　 RT-PCR法检测浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28细胞系48h后，经灰度分析示，其MMP-2/β-actin中mRNA表达分别为0.321、0.260、0.205，MMP-9/β-actin中mRNA的表达分别为0.244、0.192、0.135，随着药物浓度的增加，MMP-2、MMP-9中mRNA的表达水平下降。
　　 结论：实验结果表明浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏可抑制人胃高、中分化腺癌MKN28、SGC7901的细胞生长、诱导其凋亡，且呈剂量依赖性；随着药物作用时间延长，抑制率呈时间依赖性，其48h抑制率的增幅高于72h；相同作用条件下，高分化MKN28细胞株较中分化SGC7901细胞株凋亡率高；槐耳浸膏可抑制高分化腺癌MKN28细胞中MMP-2、MMP-9的分泌，其抑制程度与药物浓度呈正相关。槐耳浸膏可抑制胃癌细胞生长、诱导其凋亡、抑制MMP-2和MMP-9的分泌，具有一定抗肿瘤作用，为其今后应用于临床辅助治疗胃癌提供了理论依据。