儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后疫苗特异性初始T细胞及记忆T细胞表型研究

摘要

目的:通过研究儿童甲型H1N1流感疫苗的远期特异性初始T细胞和记忆T细胞的表型特征,为接种甲型H1N1流感疫苗的远期效果评价及新疫苗研制和接种策略提供理论指导。
　　方法:(1)在家长自愿的基础上,选择31例于2009年12月~2010年1月在深圳市龙岗区妇幼保健院接种甲型H1N1流感疫苗的3~6岁儿童为研究对象。(2)抽取外周静脉血3ml,分离淋巴细胞加入甲型H1N1流感疫苗为实验组,设未加疫苗为对照组,置5％CO2培养箱中37℃培养50h。以FCM分别检测细胞表面分子:CD4/CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7。
　　(3)实验组与对照组置5%CO2培养箱中37℃培养50h后加入CCK-8试剂继续培养1h。以CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞增殖指数。
　　结果:(1)PBMC中CD4+和CD8+T细胞组成比例以CD4+T细胞为优势,P﹤0.05;CD4+T细胞在实验组的占比为29.85%,明显低于对照组的39.00%,P﹤0.05;CD8+T细胞在两组中所占比例无明显差异,P﹥0.05。
　　(2)CD4+CD45RA+初始T细胞在实验组与对照组的比例均高达70%以上,两组比较差异无统计学意义,P﹥0.05;按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计学意义,P﹥0.05。在CD8+CD45RA+也得到相似的数据。
　　(3)CD4+CD45RO+记忆T细胞在实验组占28.54%,在对照组占25.52%,两组比较差异无统计学意义,P﹥0.05;按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计学意义,P﹥0.05。
　　(4)CD4+CD45RO+记忆T细胞二个亚群检测结果:CCR7和CD62L单阳性记忆T细胞亚群在实验组占比明显低于对照组的占比,P﹤0.05。
　　(5)CD8+CD45RA+初始T细胞在实验组与对照组的占比均高达80%以上,两组比较差异无统计学意义,P﹥0.05;按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计学意义,P﹥0.05。
　　(6)CD8+CD45RO+记忆T细胞在实验组与对照组均占17-19%,P﹥0.05;按抗体水平高低分三组进行比较差异无统计学意义,P﹥0.05。
　　(7)CD8+CD45RO+记忆T细胞二个亚群检测结果:CCR7和CD62L单阳性记忆T细胞亚群在实验组的占比明显低于对照组的占比,P﹤0.05。
　　(8)应用CCK-8法检测疫苗刺激后抗原特异性增殖,检测结果见细胞增殖指数大于0.8的仅为51.16%,大于1.0在本研究中没有。
　　结论:(1)本研究表明31例儿童T细胞CD4+为优势细胞,初始T细胞CD45RA+均较高,具有抗原再刺激后再应答的基础;但实验组初始T细胞不高,说明对该疫苗的免疫记忆基础差。
　　(2)本研究31例儿童CD4+记忆T细胞为主要表型特征。疫苗特异性记忆T细胞结果提示甲流疫苗接种3年多后特异性记忆T细胞数量不多,其功能无特异性再次应答。
　　(3)本研究31例儿童记忆T细胞亚群具有多样性,以中央型记忆细胞为主要表型特征;细胞增殖指数结果表明疫苗特异性细胞增殖不佳。

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前言

1 材料与方法

1.2 主要实验试剂

1.1 主要实验材料

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 H1N1疫苗接种儿童CD4+ 、CD8+T细胞检测结果

2.2 H1N1疫苗接种儿童CD4+CD45RA+初始T细胞检测结果

2.3 H1N1疫苗接种儿童CD4+CD45RO+记忆T细胞检测结果

2.4 H1N1疫苗接种儿童CD4+CD45RO+记忆T细胞亚群检测结果

2.5 H1N1疫苗接种儿童CD8+CD45RA+初始T细胞检测结果

2.6 H1N1疫苗接种儿童CD8+CD45RO+记忆T细胞检测结果

2.7 H1N1疫苗接种儿童CD8+CD45RO+记忆T细胞亚群检测结果

2.8 H1N1疫苗接种儿童疫苗特异性细胞增殖指数检测结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述

致谢

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