抗癌药物放线菌素D新类似物DNA结合活性及体外转录抑制活性的研究

摘要

为了得到高效低毒的放线菌素D类似物，以放线菌素D和DNA复合物结构及放线菌素D类似物的构效关系为基础，合成了两个放线菌素D类似物([D-Phe2，L-Me-Leu5]2AMD和[D-Phe2，D-Me-Leu5]2AMD)以及母体。合成采用液相的方法，所有中间产物用质谱、1HNMR和[α]D表征，终产物用高分辨质谱(HR-MS)、1HNMR和[α]D表征。 我们已经研究了十四个类似物抗肿瘤活性，为了更加明白类似物抗肿瘤活性产生差异的分子基础，本实验中采用UV-Vis光谱法测定了类似物和小牛胸腺DNA的作用方式和作用强度，用pGEM质粒/T7RNA聚合酶体外转录系统测定了类似物抑制体外转录活性。 可见光谱显示2位保持不变，延长或者缩短环肽中5位氨基酸侧链的长度，用MeLeu、D-MeLeu、Me-alloIle和Sar替换原有的MeVal的类似物与母体作用方式相同，以嵌入作用与DNA结合；2位Phe取代的所有类似物从这种较强作用力变为较弱的侧面结合作用。得到了抑制转录50％的药物浓度(IC50)，发现放线菌素D类似物抑制转录活性与DNA结合活性密切相关，相比较于DNA结合活性，体外转录抑制活性与抗肿瘤活性MTT结果的关系更密切。2位保持不变的类似物抑制转录活性优于母体或者与母体相当。环肽2位D-Phe的类似物中，其5位取代为：Sar、D-MeAla、D-MeVal、MeLeu、D-MeLeu、Me-alloIle、L-MePhe、D-MePhe、D-Val和D-Phe的类似物，抑制转录活性较母体下降4-7倍，类似物2-D-Phe-5-D-MePhe，2-D-Phe-5-D-Phe，2-D-Phe-5-D-Val抑制转录活性远远不及母体。由合成RNA的电泳图谱我们推测某些类似物不仅抑制DNA模板的表达，而且有明显降解RNA作用。两个活性实验均显示出5位氨基酸的侧链和N-甲基对放线菌素D的DNA结合活性和抑制转录活性有重要影响， 本论文的工作验证并补充了放线菌素D抗肿瘤作用发挥的机制以及构效关系的研究，为今后合理设计类似物，以及筛选类似物实验方法方面提供了有意义的参考数据。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

第一章放线菌素D相关研究进展

第二章放线菌素D类似物的全合成

第三章:放线菌素D类似物的DNA结合活性

第四章放线菌素D类似物体外转录抑制活性

参考文献

在学期间研究成果

致谢

附图