化合物TM对帕金森病模型中α-突触核蛋白的降解及机制研究

摘要

目的：观察化合物TM对α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）降解的影响，并探讨其可能的作用机制。
　　方法：体外培养PC12/α-syn-A53T细胞株，经多西环素诱导过表达α-突触核蛋白建立帕金森病的体外模型，不同浓度的化合物 TM及联合应用溶酶体抑制剂（CQ）和蛋白酶体抑制剂（MG132）处理细胞24 h，免疫印迹法检测α-突触核蛋白、自噬标志性蛋白LC3和免疫蛋白酶体亚基β5i（LMP7）的蛋白表达水平， real-time PCR检测蛋白酶复合体亚基基因的表达水平，荧光法检测糜蛋白样蛋白酶经TM处理后的活性变化。利用α-syn-A53T转基因小鼠作为帕金森病的体内模型，灌胃TM(10mg/kg)，每天一次，连续4 W，末次给药后通过抓力实验和滚轮实验检测动物的行为学变化，免疫印迹法检测中脑α-突触核蛋白的变化。
　　结果：PC12/α-syn-A53T细胞株经多西环素诱导后能稳定过表达突变的α-突触核蛋白，Western blot检测发现TM有效的降解α-突触核蛋白，且具有时间依赖性和剂量依赖性；TM联合溶酶体抑制剂（CQ）组的α-突触核蛋白水平较单独CQ组低。TM上调免疫蛋白酶体亚基β5i（LMP7）的mRNA和蛋白表达，升高糜蛋白样蛋白酶的活性，不影响自噬标志性蛋白LC3的改变。α-syn-A53T转基因小鼠灌胃TM4 W后，纹状体中α-突触核蛋白的水平较对照组明显降低。
　　结论：化合物TM通过蛋白酶体途径降解α-突触核蛋白，其作用机制可能是通过上调LMP7蛋白的表达，激活蛋白酶体的活性从而降解α-突触核蛋白。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 TM对PC12/A53T-α-syn细胞活力及毒性的影响

2.2 TM降解PC12/A53T-α-syn细胞中过表达的α-突触核蛋白

2.3 TM降解细胞内的α-syn(A53T)的作用机制

2.4 转基因小鼠的鉴定

2.5 行为学实验检测TM对帕金森模型动物的治疗效果

2.6 TM对小鼠纹状体中α-syn(A53T)表达水平的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

综述:α-突触核蛋白与帕金森氏病

致谢

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