胆固醇结合基序对mCRP与配体互作调控的机制研究

摘要

C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是多种炎症性疾病（如心血管疾病）的风险标识，并直接参与调控炎症病理过程。很多研究表明CRP的功能和它的构像和所在位置有关，而大部分CRP的促炎效应则是以mCRP形式表现出来。我们课题组先前的研究发现，CRP内在的胆固醇结合基序（cholesterol binding sequence，CBS，肽段35-47位氨基酸序列）可以竞争性地抑制mCRP与配体的结合。然而mCRP与配体相互作用的机制目前尚不明确。本研究首先利用大肠杆菌来表达缺失CBS序列的mCRP蛋白，在突变体蛋白与配体的结合实验中发现该突变体蛋白几乎丧失了与配体的结合能力。其次，基于分子动力学模拟，发现CBS具有固有无序蛋白的结构特征，这为mCRP与多种配体结合提供了基础。然后利用mCRP刺激内皮细胞后观察单核细胞的粘附性，发现CBS的加入能显著抑制mCRP引起的单核细胞对内皮细胞的粘附。同时，在小鼠腹腔共同注射mCRP与CBS后，则降低了炎症因子IL-6的释放。研究表明CBS肽段可以同时抑制mCRP在体外和体内的促炎反应。CBS是mCRP的主要识别位点，并且预测CBS可能是mCRP调节促炎反应的重要序列，优化后的CBS多肽可以作为mCRP的潜在抑制物。

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第一章 引言

1.1 五聚体C反应蛋白简介（Pentameric C-reactive protein）

1.2 CRP与炎症

1.3 CRP的体外研究与动物模型

1.4 五聚体CRP解离为mCRP

1.5 mCRP与炎症

1.6 mCRP与配体

1.7 mCRP的潜在研究价值

1.8 固有无序蛋白（intrinsically disorder proteins，IDPs）

1.9 本文的研究意义

第二章 材料与方法

2.1 mCRP突变体蛋白的表达和纯化步骤

2.2 圆二色谱技术

2.3 荧光光谱分析

2.4 蛋白与配体的结合

2.5 单层膜插膜实验

2.6 分子动力学模拟

2.7 单核细胞和内皮细胞的粘附

2.8 小鼠的炎症诱导

第三章 结果与分析

3.1 mCRP突变体的表达纯化

3.2 CRP来源多肽的合成

3.3 CBS缺失的mCRP突变体蛋白削弱了与配体的结合能力

3.4 CBS序列的固有无序性和其构像特征

3.5 细胞水平CBS对mCRP促炎功能的影响

3.6 小鼠中CBS肽段对mCRP的影响

3.7 结果与讨论

参考文献

在学期间研究成果

致谢