狼疮性肾炎患者治疗无反应的临床风险因素及Wnt/β-Catenin信号通路的作用

摘要

本文从以下几个部分展开论述：
　　第一章 Ⅳ型狼疮性肾炎临床风险因素分析
　　目的：
　　寻找目前常规治疗方案下，造成Ⅳ型狼疮肾炎（lupus nephritis，LN）患者治疗无效的临床风险因素。
　　方法：
　　纳入经肾脏穿刺活检确认为Ⅳ型LN，经过激素及常规免疫抑制剂治疗并且随访超过6个月的患者，按照6个月后的治疗效果分为有效组和无效组，从人口学特征、临床表现、实验室检查、自身抗体、病理学指标、治疗方案及转归情况各个方面分析组间差异，使用Kaplan-Meier法筛选影响Ⅳ型LN临床疗效的风险因素，建立多因素COX回归模型分析其独立风险因素。
　　结果：
　　1.资料完整且规律随访的IV型LN患者共198人，无效组50（25.25％）人，有效组148（74.75%）人，两组诱导期治疗方案无统计学差异。
　　2.与有效组相比，无效组光过敏、肾功能异常、中等量蛋白尿、抗RNP抗体阳性比例、肾小球球性硬化比例、慢性化指数（chronicity index，CI）、肾间质慢性化程度、肾间质细胞浸润程度及非炎症坏死性血管病变（nonin-flammatory necrotizing vasculopathy，NNV）比例明显增高（P＜0.05）。
　　3.进一步Kaplan-Meier分析显示：肾功能异常、肾间质慢性化病变及间质细胞浸润的患者治疗无效率增高（Log Rank　　4.建立多因素COX回归模型提示起病时肾功异常是LN短期预后不良的独立风险因素。
　　结论：
　　对于常规诱导方案治疗的Ⅳ型LN，起病时肾功能异常的患者临床疗效差，同时抗RNP抗体阳性及伴有肾间质慢性化病变、间质细胞浸润、NNV可能也是LN治疗反应较差的风险因素。
　　第二章 Wnt/β-Catenin信号通路在狼疮性肾炎中的表达及其机制探讨
　　目的：
　　1.明确wnt/β-Catenin信号通路在LN中的表达情况。
　　2.探讨wnt/β-Catenin信号通路参与LN可能的病理机制，拓展对于LN的发病机制的理解。
　　方法：
　　1.以各种急慢性肾脏病组织切片为肾病组，癌旁3cm明确无癌组织浸润处组织切片为正常对照组，使用免疫组化法对比两组患者肾脏组织内wnt/β-Catenin信号通路蛋白水平各指标有无差异。
　　2.选取行肾脏穿刺活检明确并处于病情活动期的LN患者为研究对象，体检中心健康体检者为正常对照，同时纳入非LN（NLN）的肾病患者，使用ELISA法分别对比LN组与正常对照组、LN组与NLN组血清中wnt/β-Catenin信号通路各指标有无差异；对随访时间大于6个月的LN患者，分为治疗有效组及治疗无效组，对比两组血清中wnt/β-Catenin信号通路在蛋白水平上各指标有无差异。
　　3.选取行肾脏穿刺活检明确并处于病情活动期的LN患者为研究对象，体检中心健康体检者为正常对照，使用实时荧光定量法（RT-PCR）对比两组血清中wnt/β-Catenin信号通路在mRNA水平上各指标有无差异。
　　结果：
　　1.免疫组化法分析肾脏组织wnt/β-Catenin的表达，纳入肾病组37（71.2%）人，正常组15（28.8%）人，两组间年龄、性别相匹配，肾病组β-Catenin平均光密度高于正常组（P=0.032），两组间wnt1、DKK1差异均无统计学差异。
　　2.ELISA实验中，纳入LN组18（49%）人，正常组19（51%）人，两组间年龄、性别相匹配，LN组UTP、Scr、IFN-α高于正常组（P<0.05），其余wnt1、β-catenin、DKK1均无统计学差异。进一步分析LN与NLN患者血清中wnt1、β-catenin、DKK1指标的差异，LN组为18（34%）人，NLN组45（66%）人，两组性别、年龄相匹配，LN组的β-catenin水平高于NLN组（P<0.05），而wnt1水平低于NLN组（P<0.05），其余指标无统计学差异。根据是否达到临床缓解，进一步将LN患者分为治疗有效组与治疗无效组，治疗有效即达到CR或PR，共8（47%）人，治疗无效为临床未缓解，共10（53%）人。对比后发现两组间尿素氮、UTP及β-catenin均高于有效组（P<0.05），虽然两组Scr值差异无统计学差异，但无效组明显高于有效组，其余各指标未见明显差异。
　　3.RT-PCR实验中纳入LN组15（53.6%）人，正常对照组13（46.4%）人，两组间性别、年龄相匹配，狼疮组UTP高于正常组（P<0.05），但wnt1、β-catenin、DKK1均无统计学差异。
　　结论：
　　1.wnt/β-catenin信号通路在LN中处于激活状态，伴随着β-catenin的升高，且和LN患者的疗效相关，治疗无效患者wnt/β-catenin信号通路相关分子表达升高；
　　2.结合以往的研究认为wnt/β-catenin信号通路通过多种机制触发LN及促进病情进展，它一方面促使肾小管上皮细胞及足细胞发生上皮间充质转变（epithelial mesenchymal transition，EMT），肾脏间质胶原纤维沉积，导致肾脏间质纤维化；另一方面介导树突状细胞（Dendritic Cells，DCs）调节下的免疫微环境改变，使效应T细胞向Treg细胞分化，促进免疫耐受，同时又和TLR7/MyD88/NF-kB信号途径相互作用调节免疫稳态。
　　3.Wnt/β-catenin信号通路可能是LN难治或复发的重要影响因素，深入理解它在LN病理机制中的作用，将为精准化靶向治疗提供了一个方向。

目录

声明

缩略词表

第一章 IV型狼疮性肾炎临床风险因素分析

Abstract

前言

对象与方法

2.1 研究对象

2.2 研究方法

2.3 统计学方法

结果

3.1 患者一般情况

3.2 造成IV型LN患者疗效不佳的临床因素

3.3多因素COX回归分析IV型LN患者疗效不佳的临床风险因素

讨论

参考文献

第二章 Wnt/β-Catenin信号通路在狼疮性肾炎中的表达及其机制探讨

Abstract

前言

对象与方法

2.1 研究对象

2.2 研究方法

2.3 统计学方法

结果

3.1肾脏组织中蛋白质水平比较：

3.2 血清中蛋白质水平比较：

3.3血清中mRNA水平的比较

讨论

结论

参考文献

综述:Wnt/β-Catenin信号通路在急慢性肾脏病中的表达

致谢