肝素酶在幽门螺杆菌感染致胃癌发病机制中的作用及其临床意义

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前言

第一部分 H.pylori感染通过增强肝素酶表达影响MKN-45细胞增殖侵袭及其机制

1.实验材料

1.1 实验仪器

1.2 主要试剂

1.3 主要工作液配制

2.实验方法

2.1 细胞培养

2.2 H.pylori培养

2.3 H.pylori与MKN-45细胞共培养

2.4 SB203580（MAPK抑制剂）的干预

2.5 细胞转染（HPA1基因沉默）

2.6 实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测各组HPA mRNA变化

2.7 Western blot实验检测HPA蛋白、MAPK蛋白、NF-kB蛋白表达

2.8 CCK-8实验检测细胞增殖活性

2.9 Transwell实验检测肿瘤细胞侵袭能力

2.10 划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力

2.11 克隆形成实验

2.12 统计分析

3 实验结果

3.1 幽门螺旋杆菌（H. pylori，Hp）、胃癌细胞MKN-45培养及其共培养

3.2 胃癌MKN-45细胞中的HPAmRNA表达使用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测

3.3 H.pylori感染胃癌MKN-45细胞导致HPA在分子和蛋白水平的变化

3.4 H.pylori感染胃癌MKN-45细胞后通过激活p38MAPK信号途径导致HPA表达的增高

3.5 MAPK抑制剂明显减弱了共培养后HPA的表达

4. 讨论

5.小结

第二部分 肝素酶在H. pylori感染致胃癌组织中的表达及临床意义

1. 试验材料和方法

1.1 标本来源

1.2 实验试剂及相关设备

2. 实验方法

2.1 H. pylori感染检测

2.2 免疫组化法检测胃癌组织、癌旁组织中HPA表达、MAPK表达

2.3 免疫组化阳性结果判断

3. 实验结果

3.1 患者胃组织中H.pylori感染的判定

3.2 HPA和MAPK蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织和健康体检者

3.3 胃癌组织中H.pylori感染明显高于健康体检者

3.4 H.pylori感染、HPA蛋白和MAPK蛋白表达与胃癌的病理特征的联系

3.5 H.pylori感染、HPA蛋白表达和预后的关系

3.6 H.pylori感染、MAPK蛋白表达和预后的关系

3.7 COX回归模型预后分析

3.8 统计学结果分析

4. 讨论

5. 小结

结论

参考文献

综述:肝素酶在炎症及肿瘤中的作用

在学期间的研究成果

致谢