双醋瑞因对骨关节炎关节软骨退变过程中结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响

摘要

背景：骨关节炎(OA)是最常见的一种关节炎并且是致残的主要原因。目前关于骨关节炎的病因尚未完全清楚，治疗目的主要是减轻疼痛、改善运动和功能。双醋瑞因是近年来治疗 OA的新药，其能抑制软骨降解，促进软骨修复，从而具有保护软骨的作用。临床应用双醋瑞因治疗骨关节炎已取得了良好的效果，但其治疗的确切机制尚不清楚。
　　目的：本研究的目的是将不同浓度的双醋瑞因作用于体外 IL-1β诱导的大鼠关节软骨细胞中，观察其对关节软骨细胞的影响及其可能的作用机制，为双醋瑞因在临床上的应用提供理论依据。
　　方法：
　　（1）体外培养SD大鼠关节软骨细胞，HE染色和II型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞，rhIL-1β刺激软骨细胞制备体外OA模型。
　　（2）实验分成正常对照组、模型组（10ng/ml rhIL-1β）和实验组（不同浓度双醋瑞因+10ng/ml rhIL-1β）。
　　（3）利用①MTT比色法观察软骨细胞的增殖情况；②Annexin V-FITC/PI双染细胞，流式细胞术观察软骨细胞凋亡率；③应用 Western Blot和RT-PCR从蛋白质和mRNA两水平检测结缔组织生长因子的表达。以上实验均重复三次。
　　结果：
　　（1）原代软骨细胞呈多角形,胞质均匀，HE染色成红色；免疫荧光染色后阳性部位呈现黄绿色。
　　（2）MTT法结果显示:与正常对照组比较，双醋瑞因能促进软骨细胞MTT增殖活性以浓度为10-5M更明显，IL-1β作用后各实验组软骨细胞增殖能力下降，但与正常对照组比较浓度为10-4M和10-5M双醋瑞因仍能促进软骨细胞MTT增殖活性。
　　（3）软骨细胞凋亡的检测结果显示：与正常对照组对比加rhIL-1β的模型对照组能够显著促进软骨细胞的凋亡。而加双醋瑞因组软骨细胞凋亡率明显减少，与模型对照组比较有统计学意义。
　　（4）Western Blot检测结果显示：IL-1β能够降低 CTGF的表达，与正常组比较有统计学差异，浓度为10-5M双醋瑞因能够显著促进 IL-1β诱导下CTGF的表达，与模型组比较有统计学差异。
　　(5)Real-time PCR检测结果显示：与正常对照组比较，模型组软骨细胞中CTGFmRNA的表达量下降21.92（3.78）倍，加入浓度为10-5M双醋瑞因后CTGFmRNA的表达量升高为模型组的2-1.4（0.38）倍。
　　结论：双醋瑞因可以促进IL-1β诱导下CTGF的高表达，其可能是双醋瑞因促进软骨细胞的分化增殖，治疗骨关节炎的作用机制之一。

目录

封面

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中文摘要

前言

材料与方法

1．材 料

2.方 法

结果

1.大鼠关节软骨细胞培养及鉴定的形态学观察

2. MTT法检测双醋瑞因对关节软骨细胞的增殖抑制作用

3.软骨细胞凋亡的Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测分析结果

4. Western Blot检测双醋瑞因对IL-1β作用下的关节软骨细胞中CTGF蛋白表达的影响

5. RT-PCR检测双醋瑞因对关节软骨细胞结缔组织生长因子mRNA的表达

讨论

一、骨关节炎的病因及发病机制

二、骨关节炎体外模型的制备

三、结缔组织生长因子与骨关节炎

三、双醋瑞因与骨关节损伤

结论

参考文献

英文摘要

致谢

英文缩略词表

声明

综述:一氧化氮合成酶在骨关节炎研究中的新进展