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长循环脂质体联合磷脂复合物及磷酸钙包裹的介孔二氧化硅在抗肿瘤治疗中的应用

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摘要

第一章 绪论

1.1 长循环脂质体

1.1.1 脂质体

1.1.2 长循环脂质体

1.2 磷脂复合物在生物医药领域的运用

1.2.1 磷脂复合物简介

1.2.2 药物磷脂复合物的特点

1.3 介孔二氧化硅

1.4 光动力治疗

1.4.1 光动力治疗的基本原理

1.4.2 光动力治疗肿瘤的主要作用机制

1.5 包载药物的选择

1.5.1 丝裂霉素简介

1.5.2 阿霉素简介

1.5.3 酞菁类光敏剂简介

第二章 丝裂霉素磷脂复合物载药系统的构建及理化性质考察

2.1 实验仪器与材料

2.1.1 实验仪器

2.1.2 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的制备

2.2.2 PEG修饰的磷脂复合物纳米粒的制备

2.2.3 不同修饰磷脂复合物纳米粒的形态观察

2.2.4 纳米复合物的粒径和Zeta电位的测定

2.2.5 丝裂霉素磷脂复合物纳米粒稳定性的考察

2.3 结果与讨论

2.3.1 丝裂霉素磷脂复合物的制备

2.3.2 不同修饰丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的制备方法

2.3.3 叶酸PEG修饰的丝裂霉素磷脂复合物纳米粒理化性质考察

第三章 不同修饰丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的体内外试验

3.1 仪器与材料

3.1.1 实验仪器

3.1.2 实验主要材料

3.1.3 细胞株

3.1.4 实验动物

3.1.5 丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的灭菌

3.2 实验方法

3.2.1 大鼠体内药物代谢动力学实验

3.2.2 不同修饰的丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的激光共聚焦实验

3.2.3 丝裂霉素磷脂复合物纳米粒的细胞毒性试验

3.2.4 流式细胞检测

3.3 结果与讨论

3.3.1 大鼠体内药物代谢动力学实验

3.3.2 不同修饰丝裂霉素磷脂复合物细胞摄取激光共聚焦实验

3.3.3 流式细胞分析仪分析两种纳米粒子的细胞摄取情况

3.3.4 小动物活体荧光成像

3.3.5 细胞毒性MTT实验

第四章 长循环脂质体磷酸钙二氧化硅纳米粒子(SCaL)的制备及理化性质的考察

4.1 仪器与材料

4.1.1 实验仪器

4.1.2 实验材料

4.2 实验方法

4.2.1 SCaL的制备

4.2.2 表征

4.2.3 载药量的测定和体外释药研究

4.3 结果与讨论

4.3.1 SCaL的制备与表征

4.3.2 药物体外释放实验

第五章 SCaL纳米粒子体内外抗肿瘤研究

5.1 仪器与材料

5.1.1 实验仪器

5.1.2 实验主要材料

5.1.3 细胞株

5.1.4 实验动物

5.1.5 SCaL纳米粒子的灭菌

5.2 实验方法

5.2.1 细胞培养

5.2.2 体外细胞毒性实验

5.2.3 共聚焦显微镜观察

5.2.4 钙离子诱导溶酶体裂解实验

5.2.5 定量检测Ca2+对纳米粒摄取的影响

5.2.6 活体小动物成像

5.3 结果与讨论

5.3.1 海拉细胞层面上的抗癌研究

5.3.2 SCaL纳米粒子的体外细胞摄取研究

5.3.3 钙离子诱导的溶酶体裂解

5.3.4 钙离子增强海拉细胞对纳米粒子的摄取实验

5.3.5 SCaL纳米粒子的活体生物分布和肿瘤靶向研究

全文总结与展望

参考文献

硕士期间发表论文

致谢

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摘要

纳米药物传递系统种类多样,优势明显。良好的纳米药物传递系统能够降低药物的毒副作用,延长药物在体循环时间,缓控释药物以及拥有良好的靶向性能等特点,使得其具有更好的疗效和治疗指数。然而在抗癌药物载体的研究中,许多药物传递系统的细胞摄取效果并不佳,若长循环脂质体运用在纳米药物传递系统中,势必能够增加药物载体的生物相容性,延长药物在体循环时间。
  本课题研究了长循环脂质体在“软物质”和“硬颗粒”两种模型纳米药物载体中的应用,分别对其形态、粒径、电位等理化性质进行了表征,对其稳定性、细胞毒性、小动物活体荧光成像等均进行了深入研究。在“软物质”的应用中,本研究利用溶剂挥发法制备丝裂霉素大豆卵磷脂复合物纳米颗粒,并且用叶酸PEG对其进行修饰,所制备的纳米颗粒粒径为338 nm。药物代谢动力学研究中使丝裂霉素在大鼠体内半衰期达到3.45小时。在“硬颗粒”的运用中,本文利用表面活性剂模板法制备出粒径70 nm的介孔二氧化硅,最终使用挤出法制备出长循环脂质体@磷酸钙@介孔二氧化硅纳米颗粒,在小动物活体荧光成像中显示出优越的肿瘤富集作用。
  实验结果表明,长循环脂质体的引入,能够使普通纳米药物传递系统发挥出更好的抗肿瘤效果。如叶酸PEG修饰的磷脂复合物纳米颗粒使丝裂霉素稳定性提高,在体循环时间延长;长循环脂质体@磷酸钙@介孔二氧化硅纳米颗粒能够发挥出多重抗肿瘤功效。

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