原发性高血压患者血清FGF21水平检测和FGF21基因载体的构建及表达

摘要

目的：
　　1.检测原发性高血压患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平，初步探讨FGF21与原发性高血压的相关性。
　　2.构建人和小鼠FGF21表达载体，并在大肠杆菌中表达，纯化后获得小鼠和人的FGF21融合蛋白。为后期动物实验作准备。
　　方法：
　　1.实验对象分为三组，原发性高血压伴动脉粥样硬化组（n=10）、原发性高血压非动脉粥样硬化组（n=20），正常对照组（n=30）。采用酶法测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，血清FGF21、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平采用酶联免疫法测定。
　　2.分别从人和小鼠肝脏提取总RNA后，经RT-PCR扩增获得目的片段，构建其T载体进行保存。以T载体为模板，扩增FGF21 mat-peptide，连接至pGEX-4T-3、 pET-28a(+)表达载体中，构建重组原核表达质粒pGEX-4T-3-MFGF21、pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。将各重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳以鉴定是否为可溶性表达，采用亲和层析法纯化各表达产物后，进行Western blotting鉴定。
　　结果：
　　1.原发性高血压伴动脉粥样硬化组、原发性高血压非动脉粥样硬化组血清FGF21、ox-LDL、TG水平均明显高于对照组（P<0.05）；线性相关分析显示血清FGF21水平与ox-LDL、TG均呈正相关。
　　2.成功构建重组质粒 pGEX-4T-3-MFGF21、 pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。可溶性表达后成功纯化出GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21，经Western-blotting鉴定为目的蛋白。
　　结论：
　　1. FGF21与原发性高血压存在一定相关性。
　　2.成功构建并可溶性表达 pGEX-4T-3-MFGF21、pET28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、pET28a(+)-HFGF21，获得GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21蛋白。

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封面

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中文摘要

前言

第一部分 原发性高血压患者血清FGF21水平检测

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 人和小鼠FGF21基因载体的构建及表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文小结

参考文献

英文摘要

致谢

缩略词表

声明

附：综述 FGF21研究进展

附 测序结果