骨髓间充质干细胞治疗大鼠暴发性肝功能衰竭及其机制的初步研究

摘要

第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及其鉴定
　　 目的：分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞；并通过流式细胞仪技术对其进行鉴定。
　　 方法：采用全骨髓细胞贴壁培养筛选法分离纯化大鼠MSCs。分析培养过程中细胞出现的分化表型，判断是否为MSCs。
　　 结果：大鼠MSCs呈梭形，漩涡状方式生长，应用流式细胞技术检测MSCs表型：CD90.1高表达(99.2％)，CD29高表达(98.9％)，CD34低表达(0.5％)，CD45低表达(0.9％)。可推测培养的细胞为MSCs。
　　 结论：采用全骨髓贴壁筛选法可以成功分离培养出高纯度大鼠MSC。
　　 第二部分骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝功能衰竭
　　 目的：采用MSC尾静脉移植治疗肝衰竭大鼠，并且与模型对照组及正常对照组进行比较，观察各组大鼠的肝功能、生存率、MSCs的归巢情况、肝组织病理改善情况、TNF-α水平。
　　 方法：将按第一部分方法培养出的大鼠MSCs用DAPI进行标记；采用CCL4灌胃的方法制作大鼠暴发性肝功能衰竭模型，分为实验组和模型对照组，空白对照组大鼠灌服生理盐水；将标记的细胞经尾静脉移植入实验组和正常对照组，模型对照组尾静脉注射等量的生理盐水；实验组与模型对照组进行比较，持续观察并记录2组大鼠一般状况、生存率等情况，分别于术后7d、14d处死两组大鼠，检测肝功能及肝脏病理变化，ELISA法检测TNF-α水平；冰冻切片后荧光显微镜下观察MSCs归巢至肝脏的情况，并与正常对照组比较。
　　 结果：DAPI可成功标记MSCs，细胞标记效率达98％；造模后大鼠24小时内逐渐进入肝衰竭状态，表现为拒食，活动明显减少，萎靡、嗜睡或逐渐发展为昏迷状态，对外界刺激反应较迟钝或至无反应，全身毛蓬松，尿失禁，尿色深黄，便溏，解剖发现中毒性鼓肠，皮下或粘膜下有出血点；生化检查发现肝功能严重损害，组织学检查显示肝细胞大片坏死、大量炎性细胞浸润；从移植术后3d开始，实验组存活大鼠一般情况比模型对照组好转更加明显，移植术后7d时，实验组与模型对照组比较，ALT指标、生存率、TNF-α水平均具有统计学差异(P＜0.05)，病理切片炎症改善情况实验组更为明显；移植术后14d时实验组与模型对照组比较，肝功能指标、生存率、TNF-α水平均具有统计学差异(P＜0.05)，病理切片炎症改善情况实验组更为明显；移植术后7d及14d，实验组MSC归巢细胞逐渐增多，空白对照组只观察到很少量归巢细胞。
　　 结论：骨髓间充质干细胞(MSC)经尾静脉同种异体移植，可以归巢到肝衰竭大鼠肝脏，能够促进急性肝衰竭大鼠肝功能的恢复，减轻肝脏组织炎症坏死和免疫状况，促进肝脏组织修复，对急性肝功能衰竭具有明显的治疗作用。

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文摘

英文文摘

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前言

第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养及其鉴定

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝功能衰竭

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

综述 骨髓间充质干细胞治疗肝衰竭的研究进展