泽泻抑制C3介导的肾小管上皮细胞间充质转分化

摘要

目的： 观察泽泻对C3介导的肾小管上皮细胞间充质转分化的影响。
　　 方法:
　　 （一）细胞实验部分
　　 （1）体外培养人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)，将其分成对照组（Control组）、0.1μM C3a组（C3a组）、0.1μM C3a+泽泻醇B(0.1μM)组（C3a+0.1μM泽泻醇B组）、0.1μM C3a+泽泻醇B(1μM)组(C3a+1μM泽泻醇B组)、0.1μM C3a+泽泻醇B(10μM)组（C3a+10μM泽泻醇B组）、0.1μM C3a+泽泻醇B(100μM)组（C3a+100μM泽泻醇B组）,用RT-PCR法检测HK-2细胞C3 Mrna的表达。
　　 （2）将HK-2细胞分成control组、C3a组、泽泻醇B组、C3a+泽泻醇B组和TGFβ组，RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin Mrna的表达；用免疫荧光和Western Blot检测C3、α-SMA、E-cadherin的表达。
　　 （二）动物实验部分
　　 采用单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化模型。30只清洁级雄性SD大鼠，随机分为三组：假手术组（sham—operated rats，SOR)、UUO组、泽泻治疗组。术前3日开始，泽泻治疗组给予中药泽泻9g.kg.d(溶于适量生理盐水中灌胃用），假手术组和UUO组给予等量生理盐水灌胃，每日一次，所有大鼠均自由进食和饮水。术后14天处死大鼠，取左侧肾组织于10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。行HE、Masson染色，光镜下观察各组大鼠肾间质纤维化的程度。免疫组化SP法检测肾组织a-SMA、C3、E-cadherin的表达。
　　 结果:
　　 （1）与对照组相比，C3a组C3mRNA表达水平明显增加，泽泻醇B呈浓度依赖性抑制C3mRNA表达，当泽泻醇B浓度为10μM时，与C3a组相比，C3mRNA表达显著降低。
　　 （2）RT-PCR和westernblot显示，与对照组比较，C3a组C3、a-SMAmRNA和蛋白表达增加（p<0.01），E-cadherinmRNA和蛋白表达减少（P<0.01）；与C3a组相比，C3a+泽泻醇B组出现相反的改变（p<0.05）。
　　 （3）免疫荧光检测显示，C3a组C3表达增加，a-SMA表达增加，E-cadherin表达减少；与C3a组相比，C3a+泽泻醇B组则出现相反的改变。
　　 （4）SOR组大鼠肾脏病理无明显异常，UUO组肾间质纤维化程度比SOR组严重,泽泻干预组肾间质纤维化程度较UUO组减轻，但仍重于对照组。
　　 （5）免疫组化结果表明，与SOR组相比，UUO组a-SMA大量表达， E-cadherin表达减少，C3表达增加；经泽泻干预后，a-SMA、C3的表达均低于UUO组，而E-cadherin的表达高于UUO组。
　　 结论:
　　 （1）外源性C3a可诱导HK-2细胞C3表达及肾小管上皮细胞间充质转分化；泽泻醇B抑制C 3a诱导的C3表达及肾小管上皮细胞细胞间充质转分化。
　　 （2）泽泻可下调UUO大鼠肾间质补体C 3表达，并抑制肾小管上皮细胞间充值转分化，从而起到肾脏保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分 体外细胞试验

第二部分：动物实验部分

讨 论

结 论

参考文献

致谢

中药抗肾小管上皮细胞间充质转分化的研究进展（综述）