角膜基质细胞感染茄病镰刀菌后拉曼光谱分析及真菌毒素检测

摘要

目的：体外模拟真菌感染角膜的过程，研究角膜基质细胞受茄病镰刀菌感染后生化物质组成的变化，以及细胞培养液中镰刀菌酸（FA）、伏马毒素B1（FB1）、呕吐毒素（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEA）等四种毒素的表达，进一步探讨真菌性角膜炎的发病机制。
　　方法：1、应用消化法对角膜基质细胞进行传代培养，倒置相差显微镜下观察细胞体外生长特性；制备茄病镰刀菌液，体外模拟真菌感染角膜的过程，并设置空白对照组；2、应用RenishawinVia型共聚焦显微拉曼光谱仪，获得茄病镰刀菌液感染角膜基质细胞后1d、2d拉曼光谱，分析比较各自的平均光谱；3、在第1、3、5d分别采用液相色谱—串联质谱法依次检测细胞培养液中FA、FB1、DON、ZEN等四种毒素的表达。
　　结果：1、倒置显微镜下观察可见感染组细胞内颗粒明显增多，细胞出现皱缩、脱落。5d后茄病镰刀菌菌丝完全覆盖细胞层，无法观察细胞形态。2、感染组细胞的平均拉曼光谱与正常细胞组在位置和形状上类似，但某些特征峰强度下降，体现在1005 cm-1、1186 cm-1、1657 cm-1、1449 cm-1和1311 cm-1，分别属于苯丙氨酸、酪氨酸、α-螺旋、细胞膜磷脂质和核酸碱基。3、在感染细胞后的第5天，采用液相色谱一串联质谱法从镰刀菌与细胞共培养液中毒素检测出FB1和DON，未检测出FA和ZEA。
　　结论：1、茄病镰刀菌具有较强的细胞毒性，细胞经过真菌的处理，细胞蛋白质的合成被抑制，细胞膜结构改变，细胞的遗传物质受到破坏，细胞发生死亡。2、茄病镰刀菌可在与角膜基质细胞共培养时产生FB1和DON，不产生FA和ZEA，或其含量未达检出限。真菌毒素可能在真菌性角膜炎的发生发展中发挥重要作用。

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引言

第一部分 茄病镰刀菌感染角膜基质细胞后的拉曼光谱

材料与方法

1、材料

2、方法

结果

1.小鼠角膜基质细胞的培养

2．茄病镰刀菌的培养

3．茄病镰刀菌液对小鼠角膜基质细胞增殖的影响

4、拉曼检测结果

讨论

第二部分 镰刀菌毒素的检测

材料与方法

1、材料

2、方法

3、结果

讨论

结论

参考文献

致谢

综述